Konfokālā radzenes dzīves ilguma mikroskopija

Radzenes konfokālā mikroskopija ir viena no mūsdienu pētījumu metodēm; tā ļauj veikt radzenes intravitālo uzraudzību ar audu vizualizāciju šūnu un mikrostruktūras līmenī.

Šī metode, pateicoties mikroskopa oriģinālajam dizainam un tā augstajai izšķirtspējai, ļauj vizualizēt dzīvos radzenes audus, izmērīt katra tā slāņa biezumu un novērtēt morfoloģisko traucējumu pakāpi.

Radzenes konfokālās mikroskopijas mērķis

Raksturot radzenes morfoloģiskās izmaiņas, kas rodas dažādu iekaisuma un distrofisku slimību gadījumā, kā arī ķirurģisku iejaukšanos un CL iedarbības rezultātā.

Morfoloģiskās izmeklēšanas dati ir nepieciešami, lai novērtētu patoloģiskā procesa smagumu, ārstēšanas efektivitāti un noteiktu pacienta vadības taktiku.

Norādes uz procedūru

• Radzenes iekaisuma slimības ( keratīts ).
• Radzenes distrofiskās slimības ( keratokonuss, Fuksa distrofija utt.).
• Sausās acs sindroms.
• Stāvokļi pēc ķirurģiskām iejaukšanās radzenē ( radzenes penetrējoša transplantācija, keratorefrakcijas operācijas).
• Ar kontaktlēcu valkāšanu saistītie stāvokļi.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Sagatavošana

Šo izmeklējumu var veikt bez anestēzijas līdzekļu lietošanas. Uz konfokālā mikroskopa objektīva tiek uzpilināts iegremdēšanas šķidruma piliens. Tas novērš lēcas tiešu saskari ar radzeni un samazina epitēlija bojājuma risku.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ], [ 9 ]

Tehnika radzenes konfokālā mikroskopija

Pētījums tiek veikts, izmantojot ConfoScan 4 (Nider) konfokālo mikroskopu ar 500 reižu palielinājumu. Ierīce ļauj pārbaudīt radzeni visā tās biezumā.

Izmeklējamā laukuma izmērs ir 440 × 330 μm, skenējošā slāņa biezums ir 5 μm. Lēca ar gēla pilienu tiek pielikta radzenei, līdz tā pieskaras tai, un uzstādīta tā, lai iegremdēšanas šķidruma slāņa biezums būtu 2 mm. Ierīces konstrukcija ļauj pārbaudīt radzeni centrālajā zonā un tās paracentrālajās zonās.

Kontrindikācijas procedūrai

Relatīva kontrindikācija ir smags acu kairinājums akūta iekaisuma procesa dēļ.

[ 10 ], [ 11 ]

Normāls sniegums

Normāls radzenes morfoloģiskais attēls

Priekšējais epitēlijs sastāv no 5-6 šūnu slāņiem. Visa epitēlija vidējais biezums ir aptuveni 50 µm. Atkarībā no morfoloģiskās struktūras izšķir šādus slāņus (no iekšpuses uz āru): bazālos, īlenveida šūnu un virspusējos slāņus.

• Iekšējo (bazālo) slāni veido mazas, blīvas, cilindriskas šūnas bez redzama kodola. Bazālo šūnu robežas ir skaidras un spilgtas.
• Vidējais slānis sastāv no 2–3 dzeloņainu (spārnotu) šūnu slāņiem ar dziļām invaginācijām, kurās iestrādāti blakus esošo šūnu izaugumi. Mikroskopiski šūnu robežas ir diezgan skaidri atšķiramas, un kodoli var nebūt definēti vai būt neskaidri.
• Epitēlija virspusējo slāni veido viens vai divi daudzstūrainu šūnu slāņi ar skaidrām robežām un homogēnu blīvumu. Kodoli parasti ir gaišāki nekā citoplazma, kurā var atšķirt arī perinukleāru tumšo gredzenu.

Starp virspusējā slāņa šūnām izšķir tumšās un gaišās šūnas. Epitēlija šūnu paaugstināta atstarošanas spēja norāda uz to vielmaiņas ātruma samazināšanos un sākušos lobīšanos.

Boumena membrāna ir caurspīdīga struktūra, kas neatspoguļo gaismu, tāpēc to parasti nav iespējams vizualizēt ar konfokālo mikroskopiju.

Subbazālais nervu pinums atrodas zem Boumena membrānas. Parasti nervu šķiedras izskatās kā spilgtas svītras, kas stiepjas paralēli uz tumša fona un saskaras viena ar otru. Atstarojamība (atstarojamība) var būt nevienmērīga visā šķiedras garumā.

Radzenes stroma aizņem 80–90 % no radzenes biezuma un sastāv no šūnu un ārpusšūnu komponentiem. Stromas galvenie šūnu elementi ir keratocīti; tie veido aptuveni 5 % no tilpuma.

Tipisks stromas mikroskopiskais attēls ietver vairākus spilgti neregulāras ovālas formas ķermeņus (keratocītu kodolus), kas atrodas caurspīdīgas, tumši pelēkas vai melnas matricas biezumā. Parasti ārpusšūnu struktūru vizualizācija nav iespējama to caurspīdīguma dēļ. Stromu nosacīti var iedalīt apakšslāņos: priekšējais (atrodas tieši zem Boumena membrānas un veido 10% no stromas biezuma), priekšējais-vidējais, vidējais un aizmugurējais.

Keratocītu vidējais blīvums ir lielāks priekšējā stromā, pakāpeniski samazinoties virzienā uz aizmugurējiem slāņiem. Priekšējo stromas šūnu blīvums ir gandrīz divas reizes lielāks nekā aizmugurējo stromas šūnu blīvums (ja priekšējo stromas šūnu blīvumu ņem par 100%, tad aizmugurējo stromas šūnu blīvums būs aptuveni 53,7%). Priekšējā stromā keratocītu kodoliem ir noapaļota pupiņu forma, savukārt aizmugurējā stromā tie ir ovāli un iegareni.

Keratocītu kodolu spilgtums var atšķirties. Atšķirīgā spēja atstarot gaismu ir atkarīga no to vielmaiņas stāvokļa. Spilgtākas šūnas tiek uzskatītas par aktivizētiem keratocītiem ("stresa" šūnām), kuru darbība ir vērsta uz radzenes iekšējās homeostāzes uzturēšanu. Normā un redzes laukā ir atrodamas atsevišķas aktivizētas šūnas.

Radzenes priekšējās stromas nervu šķiedras tiek vizualizētas kā spilgtas, homogēnas joslas, kas bieži veido bifurkācijas.

Descemeta membrāna parasti ir caurspīdīga un nav vizualizējama ar konfokālo mikroskopiju.

Aizmugurējais epitēlijs ir sešstūrainu vai daudzstūrainu plakanu šūnu monoslānis ar vienmērīgi gaišu virsmu uz skaidru tumšu starpšūnu robežu fona.

Ierīcei ir iespēja manuāli vai automātiski aprēķināt šūnu blīvumu, to laukumu un mainīguma koeficientu.

Radzenes struktūras patoloģiskas izmaiņas

Keratokonusu raksturo ievērojamas izmaiņas radzenes priekšējā epitēlijā un stromā.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ], [ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]