A hepatīta vīruss

Vīrusu A hepatīts ir cilvēka infekcijas slimība, kurai raksturīgs pārsvarā aknu bojājums un kas izpaužas kā klīniska intoksikācija un dzelte. A hepatīta vīrusu 1973. Gadā atklāja S. Feinstone (un citi), izmantojot imūno elektronu mikroskopijas metodi un inficējot pērtiķus - šimpanzes un marmozetes. Imūnu elektronu mikroskopijas metodes būtība ir tāda, ka pacienta ar hepatītu A fekālijām filtrāta veidā pievieno specifiskas antivielas (izvades serumu), un nogulsnes pakļauj elektronu mikroskopijai. Sakarā ar mijiedarbību ar vīrusiem ar specifiskām antivielām, tiem tiek veikta specifiska agregācija. Šajā gadījumā tos vieglāk atklāt, un antivielu ietekme uz agregāciju apstiprina patogēnu specifiskumu. S. Feinstone atklājums tika apstiprināts eksperimentos ar brīvprātīgajiem.

A hepatīta vīruss ir sfēriska forma, kura viriona diametrs ir 27 nm. Genomu raksturo vienlīniju pozitīvs RNS ar masu 2,6 MD. Supercapids nav. Simetrijas tips ir kubiskais - icosahedrs. Kapsīdam ir 32 kapsomēri, to veido četri polipeptīdi (VP1-VP4). Pēc tā īpašībām A hepatīta vīruss pieder pie ģints Heparnovirus ģints Picornaviridae. Antigēni A hepatīta vīruss (HAV - A hepatīta vīruss) ir viendabīgs. HAV reizinās ar šimpanzēm, paviāniem, hamadriliem un azartspēļu pērtiķiem (marmosetēm). Ilgu laiku vīruss nevarēja kultivēt. Tikai astoņdesmitajos gados. Bija iespējams iegūt šūnu kultūras, kurās HAV izplatās. Sākotnēji šajos nolūkos tika izmantotas resnas pērtiķu nieru transplantētās nieres (kultūra FRhK-4), un tagad - zaļo pērtiķu nieres šūnu transplantētā līnija (kultūra 4647).

Saskaņā ar PVO ekspertu ieteikumiem tika pieņemta šāda A hepatīta vīrusa marķieru nomenklatūra: A hepatīta vīrusa-NAU antivielas pret A hepatīta vīrusu: anti-NAV IgM un anti-NAV IgG.

HAV ir nelielas daļiņas ar diametru 27-30 nm, kurām ir icosahedral simetrija un viendabīgums. Uz elektronu difrakcijas raksturlieluma, kas iegūta ar imūngreģēšanas metodi, tiek noteiktas elektronu blīvās daļiņas ar virspusēji izvietotiem simetriski sakārtotiem kapotiem. Ar negatīvu kontrastvielu preparātos tiek konstatētas gan pilnīgas, gan tukšas daļiņas. Nucleocapsid NAV, atšķirībā no gripas, nesatur virsmas izvirzījumus un membrānas. Ir arī svarīgi, lai virion HAV nebūtu sirds formas struktūra.

Saskaņā ar tās fizikāli ķīmiskajām īpašībām A hepatīta vīruss ir saistīts ar ģimenes Picornaviridae ģints enterovīruss ar atomu skaitu 72. Tomēr šis taksonomijas bija pārāk neparasts, un kuriem bija iespējams atstāt izteicieni "A hepatīta vīrusu".

Tāpat kā visi Picornaviridae ģimenes vīrusi, A hepatīta vīruss satur ribonukleīnskābi. Dažas laboratorijas ir parādījušas iespēju klonēt A hepatīta vīrusa genomu, kas paver iespēju iegūt vakcīnas preparātus.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7],

A hepatīta vīrusa izturība

Vīruss ir relatīvi izturīgs pret augstām temperatūrām, skābēm, tauku šķīdinātājiem (nav lipīdu), dezinfekcijas līdzekļiem, tas panes zemu temperatūru labi. Tas viss veicina tā ilgtermiņa saglabāšanos ārējā vidē. Telpas temperatūrā tas izdzīvo vairākas nedēļas, 60 ° C temperatūrā daļēji zaudē inficēšanos pēc 4-12 stundām, pilnīgi - pēc dažām minūtēm 85 ° C temperatūrā. Augsta izturība pret hloru, kuras dēļ tā var iekļūt krāna ūdenī caur ūdens attīrīšanas iekārtu šķēršļiem.

Apkopojot visus datus, mēs varam raksturot A hepatīta vīrusu šādi:

• dabiskais kapteinis ir cilvēks;
• eksperimentālie dzīvnieki - marmozets, šimpanze;
• infekcijas avots - izkārnījumi;
• slimība - epidēmija un endēmiska;
• pārraides ceļš ir fecal-oralāls;
• inkubācijas periods - 14-40 dienas;
• pāreja uz hronisku hepatītu - nav norādīts.

IAV imunoloģiskās īpašības ir šādas:

• Prototipu celmi - Ms-l, CR-326, GVG. Visi ir imunoloģiski līdzīgi vai identiski;
• Antivielas - IgM un IgG, tiek ražotas, reaģējot uz vīrusa strukturālo proteīnu ievadīšanu un ir aizsargājošas;
• I Cilvēka seruma Y-globulīna trofiskā darbība - aizsargā vai mazina slimību ievadīšanas stāvoklī pirms infekcijas vai inkubācijas periodā.

NAU fizikāli ķīmiskās īpašības ir šādas:

• Morfoloģija ir bez čaumalas sfēriska daļiņa ar kubveida simetriju, kapsīds sastāv no 32 kapsomēriem;
• Diametrs ir 27-30 nm;
• SsS1 Density (g / cm3) - 1,38-1,46 (open daļiņas), 1,33-1,34 (nobriedis virions), 1.29-1.31 (nenobriedušu virionu, tukšas daļiņas);
• Sedimentācijas koeficients ir 156-160 nobriedušu virionu;
• Nukleīnskābe - vienstāva lineārā RNS;
• Relatīvā molekulmasa - 2,25 106-2,8 106KD;
• Nukleotīdu skaits ir 6500-8100.

NAV stabilitāte fizikāli ķīmiskajā iedarbībā ir šāda:

• Hloroforms, ēteris - ir stabils;
• Hlors, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - daļēja inaktivācija;
• Hloramīns, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - pilnīga inaktivācija;
• Formalīns, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 stundas - pilnīga inaktivācija, 1: 350, 20 ° С, 60 min - daļēja inaktivācija.

Temperatūra:

• 20-70 ° C - stabils;
• 56 ° С, 30 minūtes - tas ir stabils;
• 60 ° С, 12 stundas - daļēja inaktivācija;
• 85 ° С, 1 min - pilnīga inaktivācija;
• Autoklāvs, 120 ° C 20 minūtes - pilnīga inaktivācija;
• Sauss karstums, 180 ° C, 1 h - pilnīga inaktivācija;
• UV, 1,1 W, 1 min - pilnīga inaktivācija.

Iesniegtie dati liecina, ka A hepatīta vīrusa fizikāli ķīmiskās īpašības ir vistuvāk enterovīrusiem. Tāpat kā citi enterovīrus, HAV ir izturīgs pret daudziem dezinfekcijas šķīdumiem, vairākas minūtes pilnīgi inaktivēts 85 ° C temperatūrā un autoklāvā.

Ir pierādīts, ka A hepatīta vīrusu var atveidot cilvēka un pērtiķu šūnu primārās un transplantācijas monolītās kultūras līnijās. In vitro A hepatīta vīrusa aktīvā pavairošana kultūrās in vitro tiek novērota, lietojot pērtiķu pacientu aknu ekstraktus kā izejmateriālu. Tomēr jāatzīmē, ka visiem eksperimentiem atbilstoši reprodukcijas A hepatīta vīrusu in vitro kultūrās ņemams garš inkubācijas periods primārās eju (-10 līdz 4 nedēļām), pēc tam uzkrāšanos vīrusu ģenētiskā materiāla palielinās, bet absolūtās vērtības ir ļoti kas ir iemesls daudziem pētniekiem runāt par nepilnīgu A hepatīta vīrusa replikāciju audu kultūrās.

Apkopojot literatūras datus par A hepatīta vīrusa reprodukciju no citām kultūrām, var teikt, ka ilgstoša HAV pieredze in vitro nav neapšaubāma. Optimāli apstākļi stabilam augsta vīrusa replikācijas līmenim vēl nav noskaidroti, un tas ierobežo tā bioloģisko īpašību pētīšanu, reaģentu avota ražošanu diagnostikas un vakcīnu izstrādei.

Tajā pašā laikā literatūrā var atrast optimistiskākus spriedumus par šo problēmu. Visu jautājumu, kas saistīti ar A hepatīta vīrusa audzēšanu, risinājums ir jautājums tuvākajā nākotnē. Pētot optimāli apstākļi HAV pavairošanu šūnu kultūrā embrija nieru rēzus pērtiķiem konstatēja divus posmus: fāze infekcijas vīrusa ražošanai (līdz 6-8 dienām 5. Fragments) un fāzē intensīvās uzkrāšanās vīrusa antigēna. Ir arī parādīts, ka vissvarīgākais vīrusu antigēna uzkrāšanās notiek tā saukto veltņu audzēšanas apstākļos (rotējošas pudeles). Tādā veidā paver iespēju iegūt kultūru antigēna lielos daudzumos, un līdz ar to būs sākvielas diagnostikas sistēmu sagatavošanā un ražošanā vakcīnas preparātos.

A hepatīta epidemioloģija

A hepatīta vīruss ir cilvēka augsta patogenitāte. Saskaņā ar PVO (1987) secinājumu, ka slimības sākumā ir pietiekami inficēt tikai vienu virjonu. Tomēr praktiskā infekcijas deva, iespējams, ir daudz augstāka. Infekcijas avots ir tikai inficēta persona. Vīruss izdalās lielos daudzumos ar ekskrementiem 12-14 dienas pirms dzelti parādīšanās un 3 nedēļu laikā. Ikstērijas periods. Nav identificētas būtiskas atšķirības patogēnu izolācijā pacientiem ar dzelti un dzelte un asimptomātiskas A hepatīta formas. Infekcijas metode ir fecal-oralāla, galvenokārt ūdens, kā arī mājsaimniecības un pārtikas ceļi. Infekcijas metode ir fecal-oralāla, galvenokārt ūdens, kā arī mājsaimniecības un pārtikas ceļi. Galvenais (primārais) vīrusa pārnešanas ceļš ir ūdens. Ir iespējams arī inficēties ar gaisu. Iedzīvotāju jutīgums ir universāls. Visbiežāk bērni, kas jaunāki par 14 gadiem, ir slimi. Slimībai ir izteikta rudens-ziemas sezonalitāte.

[8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15]

A hepatīta simptomi

Inkubācijas periods ir robežās no 15 līdz 50 dienām, atkarībā no devas inficēt vīrusu, bet vidēji 28-30 dienas. Pēc tam, kad no ķermeņa, A hepatīta vīrusu kopē reģionālajos limfmezglos, nonāk asinīs un pēc tam aknu šūnas un izraisa difūzā akūtu hepatītu, kas ir kopā ar bojājumi aknu hepatocītu un retikuloendoteliālas šūnas un mazina tās detoksikācijas un barjeras funkciju. Hepatocītu bojājumi nenotiek tiešā vīrusa iedarbībā, bet gan imunopatoloģisko mehānismu rezultātā. Tipiskākais picture no A hepatīta ārstēšanā ir akūts icteric cikliska forma: inkubācijas periods, Prodromālā (preicteric), dzelte un atveseļošanās periods. Tomēr perēkļu infekcija atklāj lielu skaitu pacientu ar asimptomātisku un anicteric formas infekcijas, kuru skaits ir pārsvarā pār icteric ( "aisberga fenomens").

Postinfekcijas imunitāte ir spēcīga un ilgstoša, ko izraisa vīrusu neitralizējošās antivielas un imūnsistēmas atmiņas šūnas.

A hepatīta mikrobioloģiskā diagnoze

Diagnosis no A hepatīta (izņemot infekcijas dzīvniekiem - šimpanzes marmozet, paviāni, kas esam), pamatojoties uz dažādiem imunoloģiskajām metodēm: DGC imunofluorescences metodi, hemagglutination imūnās saķeres (komplekss vīrusa antigēnu + antivielu klātbūtnē komplementa adsorbēts uz eritrocītiem un izraisa pielipšanu) . Tomēr piemērošana šīm metodēm, ir ierobežots, jo trūkst konkrētu vīrusa antigēnu un imunofluorescences reakciju gadījumā aknu biopsijas, kas ir nevēlams. Uzticama un specifiska ir imūno elektronu mikroskopijas metode, bet tā ir ļoti darbietilpīga. Tāpēc, kamēr vienīgā pieņemamā metode imunoloģisko reakciju ir imunosorbences testa cieto fāzi formā IAA, vai RIM, jo īpaši modifikācija "uztveršanas" imunoglobulīnu M. Mūsu valstī šim nolūkam ierosinātais testēšanas sistēma - "DIAG-A-GEO". Šīs pārbaudes sistēmas darba princips ir šāds. Uz sienām polistirola lunochek sorbed pirmos antivielas pret imūnglobulīniem klases M (antiimmunoglobuliny M), pēc tam pievienojot pētāmo pacientu serumu. Ja ir antiviela klase IgM, tie būs saistīties ar antivielu-Ti-M, pēc tam pievieno konkrētā vīrusa antigēna (A hepatīta vīrusu), kura ir iegūta, audzējot šūnu kultūrā. Sistēma tiek izskalota, un tam pievieno pretvīrusu antivielas marķētas ar mārrutku peroksidāzi. Ja visas četras sistēmas sastāvdaļas mijiedarbojas, rodas četrkāršu "sendvičs":

• antiimmunoglobulīni M
• imūnglobulīni M (pret A hepatīta vīrusu - pacienta testa serumā),
• vīrusu antigēns,
• pretvīrusu antivielas, kas marķētas ar fermentu.

Lai noteiktu šo kompleksu, lunetām pievieno substrātu fermentam. Enzīma ietekmē tas tiek iznīcināts un veidojas krāsains produkts. Krāsu intensitāti var kvantitatīvi izmērīt ar spektrofotometru vai fotokolimometru.

IgM "uztveršanas" metodes priekšrocība ir tāda, ka šīs klases imūnglobulīnu antivielas parādās primārajā imūnā atbildē un norāda uz aktīva infekcijas stadiju, tās pazūd pēc pārnestās slimības. Savukārt pretvīrusu antivielas, kas ietilpst IgG klasē, turpina pastāvēt ilgu laiku pēc slimības, iegūstot imunitāti. Lai noteiktu A hepatīta vīrusu, tiek piedāvāta DNS zonde: kā zondes tiek izmantots komplementārs vRNS zonds.

A hepatīta ārstēšana

Sakarā ar to, ka vīrusu hepatīta laikā tiek traucēta interferona ražošana, A hepatīta ārstēšana balstās uz interferona lietošanu un tā endogēnas sintēzes amiksīna induktoru.

A hepatīta specifiska profilakse

Iepriekš plaši piemērota seroprevention A hepatīta izmantojot gammaglobulin nebija pamatota, tomēr uzsvars tika likts uz glabāšanu imunizācijas veikta vakcinācija pret A hepatītu. Šajā nolūkā tiek izstrādāti dažādi vakcīnu varianti, un tie jau tiek izmantoti. Krievijā efektīva vakcīna pret hepatītu A tika iegūta vēl 1995. Gadā, un tagad tā ir veiksmīgi izmantota.