Kariotipēšana

Hromosomu pētījumos bieži tiek lietotas īslaicīgas asins kultūras, kā arī kaulu smadzeņu šūnas un fibroblastu kultūras. Asins, kas tiek nogādāts laboratorijā ar antikoagulantu, tiek centrifugēts sarkano asins šūnu izgulsnēšanai, un leikocītus inkubē kultūras barotnē 2-3 dienas. Asins paraugam pievieno fitohemaglutinīnu, jo tas paātrina eritrocītu aglutināciju un stimulē limfocītu sadalīšanu. Vispiemērotākais hromosomu pētīšanas fāze ir mitozes metafāze, tāpēc kolhicīns tiek izmantots, lai pārtrauktu limfocītu sadalīšanu šajā posmā. Šīs zāles pievienošana kultūrai palielina to šūnu īpatsvaru, kas atrodas metafāzē, proti, šūnu cikla stadijā, kad hromosomas ir vislabāk redzamas. Katra hromosoma atkārtojas (ražo savu eksemplāru) un pēc atbilstošas krāsas ir redzama divu hromatīdu veidā, kas piestiprināti centromeram vai centrālajai sašaurinājumam. Pēc tam šūnas tiek apstrādātas ar hipotonisku nātrija hlorīda šķīdumu, kas ir fiksēts un krāsots.

Hromosomu krāsošanai biežāk izmanto Romanovska-Giemsa krāsu, 2% acetaminomīnu vai 2% acetazarīnu. Tās pilnībā izolē hromosomas vienādi (parastā metode), un tās var izmantot, lai noteiktu cilvēka hromosomu ciparu anomālijas.

Lai iegūtu detalizētu priekšstatu par hromosomu struktūru, individuālo hromosomu identifikāciju (noteikšanu) vai to segmentiem, tiek izmantotas dažādas diferenciālas krāsošanas metodes. Visbiežāk izmantotās metodes ir Giemsa, kā arī G- un Q-locīšana. Mikroskopiskā zāļu izpēte gar hromosomas garumu atklāj virkni krāsotu (heterohromatīnu) un krāsainu (euhromatīna) lentu. Šajā gadījumā iegūtais šķērsvirziena svītru raksturs ļauj identificēt katru komplektā iekļauto hromosomu, jo svītru maiņa un to izmēri katram pārim ir stingri individuāli un nemainīgi.

Fotografējot atsevišķu šūnu metafāzes plāksnes. Atsevišķas hromosomas tiek sagrieztas no fotogrāfijām un ielīmētas papīra loksnē kārtībā; šādu hromosomu attēlu sauc par kariotipu.

Papildu krāsošana, kā arī jaunas metodes hromosomu preparātu iegūšanai, kas ļauj garenizēt hromosomas, ievērojami palielina citoģenētiskās diagnostikas precizitāti.

Lai raksturotu cilvēka kariotipu, ir izstrādāta īpaša nomenklatūra. Normāls vīrieša un sievietes kariotips ir attiecīgi 46, XY un 46, XX. Down's sindromā, kas raksturojas ar papildu hromosomu 21 (trisomija 21) klātbūtni, sieviešu kariotipu raksturo kā 47, XX 21+ un vīriešus - 47, XY, 21+. Hromosomas strukturālās anomālijas klātbūtnē ir jānorāda mainīta garā vai īsā rokas: burts p apzīmē īsu roku, q garu roku un t pārvietošanos. Tādējādi, kad tiek izdzēsta īsā hromosomas 5 daļa ("kaķu spiediena" sindroms), sievietes kariotips tiek raksturots kā 46, XX, 5p-. Bērna māte ar translokāciju. Dauna sindroms - 14/21 līdzsvarotas pārvietošanas nesējs ar 45, XX, t (14q; 21q) kariotipu. Pārnēsājamā hromosoma veidojas, ja ilgstošās hromosomas 14 un 21 apvienojas, īsie pleci tiek zaudēti.

Katrs plecs ir sadalīts rajonos, un tie savukārt - segmentos, un tie un citi ir apzīmēti ar arābu cipariem. Hromosomas centromērs ir sākumpunkts reģionu un segmentu skaitīšanai.

Tādējādi, topogrāfijas hromosomu izmantojot četras Birku hromosomu skaits plecu raksturs rajona numuru un segmenta numurs konkrētajā teritorijā. Piemēram, 6p21.3 ieraksts nozīmē, ka mēs runājam par 6. Hromosomu pāri, tās īsās rokas, platība 21, segmentā 3. Ir vairāk izvēles varoņi, jo īpaši pter - beigās īsu rokas, qter - beigās garo roku.

Citogēniskās izpētes metode ļauj atklāt deletions un citas izmaiņas hromosomas tikai aptuveni 1 miljona bāzu (nukleotīdu) lielumā.

[1], [2], [3], [4]