Imunoloģiskie pētījumi uroloģijā

Imūmogrammas piešķiršana uroloģiskajam pacientam nozīmē, ka ārstējošais ārsts uzņemas traucējumus imūnā sistēmā. Duplicate baktēriju, vīrusu, sēnīšu infekcijas, alerģiskas reakcijas, sistēmiskas slimības var būt simptomi, šie traucējumi, ko raksturo ar vairākiem sindromu (infekcija, vēzis, alerģija, autoimūna, limfoproliferatīvas). Vienam pacientam var būt vairāki sindromi. Piemēram, hroniskas infekcijas slimības (infekcijas sindroms) var izraisīt imūndeficītu imūndeficīta var izpausties nosliece uz infekcijas slimībām un vēzi (sindroms). Iekaisums pret infekcijām var notikt pret sekundārā imūndeficīta fona, kas attīstījusies limfoproliferatīvās slimības rezultātā, piemēram, leikēmijas rezultātā. Imūnās sistēmas patoloģiskās izmaiņas ir trīs galvenās grupas:

• viena vai otra imunitātes saites kvantitatīva vai funkcionāla nepietiekamība, kas izraisa imūndeficīta stāvokļa veidošanos;
• pārkāpums imūnsistēmas antigēna atpazīšanā, kas izraisa autoimūnu procesu attīstību;
• hiperreaktīvā vai "perversa" imūnā atbilde, ko izraisa alerģisku slimību attīstība.

Ir skrīnings (1. Līmeņa testi) un imunoloģiskās diagnostikas kvalificējošie (2 līmeņu testi). Pirmie eksistē, lai noteiktu imūnsistēmas pārkāpumus, bet pēdējais - noskaidrot to ieviešanā iesaistītos mehānismus turpmākai imūnkorekcijai.

B-šūnu imunitātes saikne

Skrīninga metodes

• Noteikšana relatīvo un absolūto skaitu B-limfocītu caur imunoflorescenci vai plūsmas citometrijas, izmantojot monoklonālās antivielas uz B-šūnu antigēnu (CD19, CD20, kur CD - kopu diferenciācijas). Pieaugušajiem B-limfocītu saturs ir normāls: 8-19% no kopējā leikocītu skaita vai 190-380 šūnas / μl. Palielināšana saturu B limfocītu notiek akūtu un hronisku baktēriju un sēnīšu infekciju, hroniska aknu slimības, sistēmiskas saistaudu slimības, hroniska limfoleikoze, multiplo mielomu.
• Noteikšana koncentrācijas imūnglobulīnu nespespetsificheskih (F, M, G, E) ar vienu radiālās imūndifūzijas, vai turbometrii nefelometrisko, radioimmunoassay vai enzīmu imunoloģisko (IVN). Normas pieaugušajiem: imūnglobulīns (Ig) A 0,9-4,5 g / l. IgM 03-3,7 g / l. IgG 8,0-17 g / l. Imūnglobulīnu koncentrācijas palielināšanās notiek ar tādiem pašiem patoloģiskajiem apstākļiem, kad notiek B limfocītu satura palielināšanās. Koncentrāciju imūnglobulīnu samazināšana ir iedzimta hipogammaglobulinēmiju, audzēji, imūnās sistēmas, liesas izņemšana, olbaltumvielu zudums, slimības, nieru vai zarnu darbības traucējumiem, ārstēšanai ar citostatiķi un immunodepreesantami.

Metožu norādīšana

• Cirkulējošo imūnkompleksu noteikšana asinīs, selektīvi izgulsnējot polisilēnglikolu, kam seko spektrofotometriskā blīvuma pārbaude (parasti 80-20 UE). Cirkulējošo imūnkompleksu palielināšanās ir raksturīga akūtām bakteriālām, sēnīšu, vīrusu infekcijām, autoimūnām, imūnkompleksu slimībām, seruma slimībām, alerģiskām 3. Tipa reakcijām;
• Noteikšana specifiskiem imūnglobulīniem asinīs attiecībā uz baktēriju un vīrusu antigēniem, dezoksiribonukleīnskābes (DNS), autoimūno slimību ārstēšanai, identificēšanai spermas (autoimūna neauglības) un protivopochechnyh antivielām (pielonefrītu un glomerulonefrīts) ar radiālo imūndifūzijas vai ELISA.
• Antisperma antivielu noteikšana spermā [MAR-tests (jaukta antiglobulīna reakcija)], norma ir negatīva.
• Imūnglobulīnu koncentrācijas noteikšana urīnā diferenciāldiagnozes noteikšanai starp pielonefrītu un glomerulonefrītu (proteīnūrijas selektivitāte).
• IgE noteikšana prostatas sula alerģiskā prostatīta diagnozei radiālās imunodifūzijas vai ELISA metodē. 
• Research in reakcijas blasttransformation reakcijā limfocīti B B-šūnu mitogēns (pokeweed mitogēnu stimulācijai blasttransformation reakcijā ar B-limfocītu klātbūtnē T-limfocītu), pie kam standarta vērtību 95-100%.

Imunitātes T-šūnu saite

Skrīninga metodes

• Noteikšana relatīvo un absolūto skaitu nobriedis CD3 T limfocītu reakcija ar imunoflorescenci vai plūst cytofluorometry, izmantojot anti-SDZ monoklonālas antivielas. Norma pieaugušajiem ir 58-76% vai 1100-1700 šūnas / μl. Skaita samazināšana T-limfocītu mazspēja indikators šūnu imunitāti. Tas ir raksturīgs vairāku sekundāro un primāro imūndeficītu (hronisku baktēriju un vīrusu infekcijām: tuberkulozi, iegūtā imūndeficīta sindromu, vēzis, hroniska nieru mazspēja, trauma, stress, novecošanās, nepietiekams uzturs, ārstēšanu ar citotoksiskiem medikamentiem, jonizējošo starojumu). Skaitu T-limfocītu palielinās, ir fona imūnās hiperaktivitāte vai limfoproliferatīvo slimībām. Ar iekaisumu vispirms palielinās T-limfocītu skaits un pēc tam samazinās. T-limfocītu samazināšanās neesamība norāda uz iekaisuma procesa hronoloģiju.
• Limfocītu subpopulāciju novērtējums.
  • T-helperu (anti-CD4 antivielu) skaita noteikšana. Parasti, 36-55% vai 400-1100 šūnas / μl. Skaitu šīm šūnām palielināšana notiek autoimūna slimība, Valdenstrēma slimības, imūni aktivizācijas antitransplantatsionnogo; skaita samazināšana no T-helperu šūnu notiek hroniskas bakteriālas, vīrusu, protozoju infekcijas, tuberkulozi, iegūtā imūndeficīta sindromu, ļaundabīgiem audzējiem, apdegumu traumas, nepietiekama uztura, novecošanas, citostatiķi ārstēšanai, jonizējošu starojumu.
  • T-supresoru (anti-CD4 antivielu) skaita noteikšana. Parasti 17-37% vai 300-700 šūnas / μl. T-suppressoru skaita pieaugums notiek ar tādiem pašiem apstākļiem, kad T-palīgu skaits samazinās, un to samazināšanās tādos pašos apstākļos, kad T-palīgu saturs palielinās.
  • Imunoregulācijas indekss CD4 / CD8, 1,5-2,5 normā. Hiperaktivitāte ar ātrumu vairāk kā 2,5 (alerģiskas un autoimūno slimības); hipoaktivitāte - mazāks par 1,0 (hronisku infekciju predispozīcija). Pēc iekaisuma procesa sākuma imunoregulācijas indekss palielinās, un, kad tas samazinās, tas normalizējas.

Metožu norādīšana

• Dabisko žurētāju (NK šūnu) skaita noteikšana - anti-CD16 un anti-CD56 antivielas. CD 16 limfocītu norma ir 6-26%, CD56 - 9-19%. Skaitu NK-šūnu palielināšana notiek atgrūšanas, samazinājums - vīrusu infekcijām, vēzi, primāro un sekundāro imūndeficītu, apdegumu traumas un stresa, ārstēšana ar citostatiķi un jonizējošo starojumu. 
• T-limfocītu skaita noteikšana ar interleikīna-2 receptoru (aktivācijas marķieris) - anti-CD25 antivielas. Norma ir 10-15%. Palielināšanās to skaita tika novērota alerģisko slimību, transplantāta atgrūšanas, reaģējot uz aizkrūts atkarīgu antigēnu akūtā primārās infekcijas, samazinājumu laikā - saskaņā ar tām pašām slimībām, kas saistītas skaita samazināšana NK-šūnām.
• Aktivizēšanas marķiera ekspresijas pārbaude - HLA-DR II klases histoloģisko savietojamības molekula. Paaugstināta izpausme rodas iekaisuma procesos pacientiem ar C hepatītu, celiakiju, sifiliju, akūtām elpceļu infekcijām.
• Limfocītu apoptozes novērtēšana. Norāde par gatavību limfocītu apoptozi var identificēt ar to izpausmes virszemes Fas-receptoru (CD95) mitohondrijos un bd-2 protooncogene. Apoptozes tika novērtēts ar limfocītu apstrādi divas fluorescējošās krāsas: propidium jodīda, kas saistās pie DNS fragmentu un anneksīnu Y, saistoties ar phosphatidylserine pie šūnu membrānu, kas parādās sākumā apoptozi. Rezultātu novērtēšana tiek veikta ar plūsmas citofluorimetru. Rezultātu aprēķins pamatojas uz to krāsu attiecību, kuras krāsotas ar dažādām krāsvielām. Nevainojama šūnas ir dzīvotspējīgas šūnas, kas saistītas tikai ar anneksīnu Y, - agrīnās pazīmes apoptozes, ar propidium jodīda un anneksīnu I - vēlu izpausmes apoptozes krāsošanas tikai propidium jodīda norāda nekrozi.
• T-limfocītu proliferācijas novērtējums in vitro.
  • Šūnu blastogēnes maiņa ir reakcija no limfocītu blastu transformācijas. Leikocītus inkubē ar augu izcelsmes mitogēnu (lektīniem). Visbiežāk lietoto fitohemaglutinīnu 72 stundas, pēc tam iztukšojiet, piesūciniet un skatiet blastu skaitu! Stimulācijas indekss ir pārveidoto šūnu procentuālā attiecība eksperimentā (kultūra ar fitohemaglutinīnu) līdz pārveidoto šūnu procentuālajam daudzumam kontrolē (kultūra bez fitohemaglutinīna). Limfocītu domnas transformācijas reakciju var novērtēt, iekļaujot radioaktīvo etiķeti (ZN-timdīnu) kultivētās šūnās, jo, sadalot šūnas, palielinās DNS sintēze. Proliferatīvās atbildes traucējumi rodas gan primāro, gan sekundāro imūndeficītu gadījumos, kas saistīti ar infekcijām, onkoloģiskām slimībām, nieru mazspēju un ķirurģiskām iejaukšanās darbībām.
  • Izvērtēšana no šiem pētījumiem, izpausme aktivizēšanas marķieriem (CD25, transferīna receptora - CD71) molekulu un MHC II klases HLA-DR, kas ir būtiski prombūtnes uz resting T-limfocītu. T limfocīti stimulētas ar phytohemagglutinin pēc 3 dienām ekspresijas aktivizēšanas marķieri analizēja tiešas vai netiešas imunoflorescenci, plūsmas citometrijas, izmantojot monoklonālās antivielas izdalās receptori.
  • Mērīt mediatoru sintezēti ar aktivēto T limfocītu [interleikīna (IL) 2, IL-4, IL-5, IL-6, gamma-interferona, etc.], By radioimmunoassay vai ELISA. Īpaši svarīgi ir novērtēt y-interferona un IL-4 koncentrāciju kā TH un Th2 marķierus aktivēto kultūru supernatantē un šūnā. Ja iespējams, tas ir noderīgi, lai noteiktu gèna attiecīgajā citokīna ar līmeni messenger ribonukleīnskābes ar treonīna ražo šūnu un receptora ekspresijas intensitāti attiecīgajos citokīnus.
    
• Limfocītu migrācijas inhibēšanas reakcija. Sensibilizētie T-limfocīti, reaģējot ar antigēnu izdalošiem limfokiem, ieskaitot faktorus. Ierobežojot limfocītu migrāciju. Slāpēšanas parādība tiek novērota, kad mitogēni ievada šūnu kultūrā. Slāpēšanas pakāpes novērtējums ļauj novērtēt limfocītu spēju atbrīvot citokīnus. Parasti migrācijas biežums atkarībā no specifiskā mitogēna ir 20-80%.
• NK šūnu citotoksicitātes novērtējums. Noteikt dabisko iznīcinošo šūnu spēju nogalināt eritromeloīda līnijas K-562 mērķa šūnas. Ja tiek novērtēta antivielu atkarīga citotoksicitāte, tiek izmantotas mērķa šūnas, kas apvalkotas ar IgG antivielām. Mērķa šūnas tiek marķētas ar 3H-uridīnu un inkubē ar efektoru šūnām. Mērķa šūnu nāves tiek lēsts no radioaktīvās etiķetes izplatīšanas šķīdumā. Citotoksicitātes samazināšanās notiek ar ļaundabīgiem jaunveidojumiem. Dažos gadījumos, kad ir nepieciešama interleikīnu ārstēšanas efektivitātes prognoze, tiek novērtēta NK šūnu citotoksicitāte, kad tā tiek inkubēta ar noteiktiem citokīniem.

Fagocītu funkcijas izpēte

Skrīninga metodes

Absorbcijas intensitāte fagocīti Study of mikrobu šūnu (fagocitozi lateksa daļiņas, testa kultūras aureus, Escherichia coli, vai mikroorganismu, kas izdalīti no pacienta). Ar heparinizētu asiņu centrifugēšanu izolē leikocītu suspensiju, IV opozīcijas asins grupai pievieno serumu (oponīni ir proteīni, kas pastiprina fagocitozi). Mikrobu suspensiju atšķaida, sajauc ar leikocītu un inkubē 120 minūtes, paraugu ņemšana analīzei pēc 30.90.120 min pēc inkubācijas sākuma. No izvēlētās leikocītu suspensijas izdalās uztriepes. Noteikt sekojošus fagocitozes rādītājus:

• fagocītu indekss - to šūnu procentuālā daļa, kas ievadīja fagocitozi 30 min un 120 min inkubācijas laikā; fagocitārā indeksa norma (30) 94% no fagocitārā indeksa (120) - 92%;
• fagocītu skaits - vidējais baktēriju skaits, kas ir intracelulārais daudzums; fagocitārā nāves norma (30) 11%, fagocītu skaits (120) - 9,8%;  
• fagocitārā skaita koeficients - fagocitārā skaita (30) un fagocitārā skaita (120) attiecība; normāls 1,16;
• neitrofilu baktericīda indekss ir fagocītu iekšpusē nogalinātu mikrobu skaita attiecība pret uzņemto mikrobu kopējo skaitu; 66% likumā.

Metožu norādīšana

• Testā ar nitrozīna tetrazoliju (NST) fagocītu baktericīdās aktivitātes izpēte ir NST tests. Leikocītiem dzeltenā krāsā pievieno slāpekļa oksīda tetrazolīnu. Ja krāsvielu absorbē neitrofils, samazināšanas process notiek ar skābekļa brīvajiem radikāļiem, kā rezultātā rodas zils krāsojums. Reakciju veic 96 grādu plazmas plāksnītē. Pirmās trīs akas ar HCT un leikocītu maisījumu pievieno Hankas šķīdumu (spontāna HCT), pēdējā - lateksa daļiņas; inkubē 25 minūtes 37 ° C temperatūrā. Rezultāti tiek nolasīti lasītājā pie 540 nm un izteikti tradicionālajās vienībās. Aprēķiniet stimulācijas koeficientu (K _st ), kas ir vienāds ar optiskā blīvuma attiecību stimulētās urbās līdz vidējam optiskajam blīvumam urbās bez stimulācijas. Veseliem cilvēkiem _{HCT spont} = 90 ± 45 UE, NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1,78 ± 0,36.
• Saķeres molekulu izpēte. Ar plūsmas citofluorimetrijas palīdzību nosaka virsmas antigēnu CD11a / CD18, CD11b / CD18, CD11c / CD18 ekspresiju. Imunodeficienti, kas izraisa adhēziju, izpaužas kā recidivējošas infekcijas, lēna brūču dzīšana un infekcijas infekcijas kanālu trūkums.

Kompleksu sistēmas izpēte

Skrīninga metodes

Kompleksa hemolītiskās aktivitātes noteikšana - komplementa aktivācijas klasiskā ceļa izpēte. Antivielu pārklāta aitas eritrocīti tiek pievienoti dažādiem pacienta un veselīga cilvēka seruma atšķaidījumiem. Hemolītiskās aktivitātes vienība tiek ņemta kā seruma atšķaidījuma apgrieztā vērtība, kurā 50% eritrocītu tiek iznīcināti. Hemolīzes pakāpi fotometriski novērtē ar hemoglobīna iznākumu šķīdumā. Komplimenta hemolītiskās aktivitātes samazināšanās tiek novērota sistēmiskā sarkanā vilkēdei ar nieru darbības traucējumiem, akūtu glomerulonefrītu. Kombinētās imūndeficīta slimības, myasthenia gravis, vīrusu hepatīts, limfomas, palielinās - ar obstruktīvu dzelti, tireoīdīts Hashimoto. Reimatisms, reimatoīdais artrīts, mezoteliālais periararterīts. Dermatomiozīts, miokarda infarkts, čūlains kolīts, Reitera sindroms, podagra.

Metožu norādīšana

• Kompleksu komponentu noteikšana. Kvantitatīvo noteikšanu veic ar radiālās imunodifūzijas un nefelometrijas metodi.
  Pētījums nav informatīvs, ja vien komplementa komponentu antigēnas īpašības nav mainītas.
• Tika konstatēts, ka komplementa Clq-komponents uzlabo fagocitozi un mediē šūnu citotoksicitāti. Tās samazināšanās notiek imūnkompleksu, sistēmiskas sarkanās vilkēdes, gļotādu infekciju un audzēju slimību gadījumos.
• C3 komponente piedalās klasiskā un alternatīvā komplementa ceļa aktivizēšanā. Koncentrācijas samazināšana ir saistīta ar hroniskām baktēriju un sēnīšu infekcijām, cirkulējošo vai audu imūnsistēmu kompleksu klātbūtni.
• C4 komponents piedalās klasiskā ceļa aktivizēšanā. Koncentrācijas samazināšana ir saistīta ar ilgstošu komplementa aktivāciju ar imūnkompleksu un C1 inhibitora koncentrācijas samazināšanos, kas kontrolē klasiskā komplementa ceļa aktivāciju. C4 deficīts rodas ar sistēmisku sarkano vilkēdes vājumu, C4 palielinās ar nieru slimību, transplantāta atgrūšanu, akūtu iekaisumu un kuņģa un zarnu trakta slimībām.
• C5a ir neliels C5 molekulas fragments, kas no tā atdalīts komplementa sistēmas aktivācijas rezultātā. Palielinās tās koncentrācija ar iekaisumu, sepse, atopiskajām un alerģiskām slimībām.
• Cl inhibitors ir daudzfunkcionāls faktors. Tas kontrolē komplementa C1 komponenta aktivāciju, inhibē kallikreīna, plazmīna un aktivētā faktora Hageman, proteāžu Cls un Or. C1 inhibitora deficīts izraisa angioneirotisko tūsku.
• papildpētījumi. Standarta serumam, kam trūkst kāda komplementa komponenta, pievieno testa serumu un nosaka kompleksa hemolītisko aktivitāti. Ja hemolītiskā aktivitāte netiek atjaunota normāli, tiek uzskatīts, ka šī komplekta sastāvdaļas aktivitāte testa serumā ir samazināta.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]