Herpes diagnostika

Diagnoze herpes ir balstīta uz uzvedību klasisko vīrusu izplatīšanos, kas jutīgas šūnu kultūrās, imunofluorescences un seroloģisko metožu, veicot colposcopic pētījumus, izmantojot modernās molekulārās bioloģiskie metodes (PCR, dot-hibridizācija), kas ļauj diagnosticēt visu herpes vīrusu grupas, tai skaitā HHV-6 un HHV-7 tipi.

Herpes infekcijas laboratorijas diagnostikas metodes

Galvenās metodes, kuru mērķis ir sekvenēt HSV vai noteikt vīrusu daļiņas un / vai to sastāvdaļas	Papildu metodes, kuru mērķis ir identificēt antivielas pret HSV cilvēka ķermeņa bioloģiskajos šķidrumos
HSV izolēšana jutīgās šūnu un dzīvnieku kultūrās Tiešā un imūno elektronu mikroskopija Tiešās un netiešās MFA iespējas IFA Molekulārās bioloģiskās metodes Lateksa aglutinācijas reakcija	Neitralizācijas reakcija RSK Antivielu noteikšana HSV-1,2 nesondabīgajiem proteīniem

Ir pierādīts, ka 76% pacientu ir ģenitāliju herpes (GH), ko izraisa HSV-2, un 24% - HSV-1 tipa. GG kā monoinfekcija notika tikai 22% pacientu, 78% gadījumu tika konstatētas mikrobu asociācijas. 46% pacientu konstatēja parazitocenozi, ko izraisīja divi patogēni, tostarp 40% gadījumu tika atklāti hlamīdijas simptomi. Mazāk biežāk sastopamās uztriepes, ko nosaka gardnerelly, Trichomonas, gonokoki.

27% pacientu parazitocenozi pārstāvēja trīs un 5,2% ar četriem patogēniem. Biežāk bija hlamīdiju kombinācija ar Gardnerella un Candida sēnītēm. Šie dati pamato nepieciešamību rūpīgi bakterioloģiskai izmeklēšanai pacientu YY identificētu patogēnā aģenta kombinācijas, kā arī padziļinātu pētījumu patoģenēzē jaukto infekciju uroģenitālā trakta, kas ļautu diferencēta kompleksu terapiju HSV infekciju.

Materiāli, kas jāpārbauda HSV izolācijā, atkarībā no herpetisko bojājumu lokalizācijas

Lokalizācija bojājumu	Vezikulu saturs	Šūnas noņemšana				SDC	Aspirēt no bronhiem	Bioptat	Asinis
		1	2	3	4
Āda	+								+
Acis			+						+
Dzimumtieksme				+					+
Anus	+				+				+
Mute	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Viegls		+					+		+
Aknas								+	+
Iedzimts herpes	+	+	+				+		+

Citomegalovīrusu infekcijas laboratorijas diagnostikas metodes

Metodes	Nepieciešamais laiks, lai iegūtu rezultātus	Piezīmes
VIRUSOLOĢISKĀ
Elektronu mikroskopija	3 stundas	Satricinošs
Vīrusa izolēšana šūnu kultūrā (CPD)	4-20 dienas	Standarta, lēna
Agrīna AH imunofluorescējošā krāsošana ar monoklonālām antivielām	6 stundas	Mazāk specifiska
CYTOLOGICAL	2-3 stundas	Mazāk specifiska
SEOLAS
RSK	2 dienas	Standart
Ssubsistence	1 diena	Laborious
REEF	6 stundas	Vienkāršs, specifisks
NFIF	6 stundas	Sarežģīta
RIMF	6 stundas	Sarežģīta
IFA (IgM, TO)	6 stundas	Ātri, vienkārši
Imunoblots	6 stundas	Dārga
MOLEKULA-BIOLOĢISKĀ
MG	5-7 dienas	Dārgi, laikietilpīgi
PCR	3 stundas	Dārga

Herpes zoster vīrusa diagnosticēšanas metodes

Diagnostikas metodes	Laboratorijas metodes
NETIEŠI
Piešķiršana	Auduma kultūra, vistas embriji, laboratorijas dzīvnieki, kopkopība ar pieļaujamām šūnām vai helper vīrusiem
Izolātu identifikācija	Neitralizācijas reakcija, DSC, IF, IPPE, nogulšņu izolātu reakcija, aglutinācija, IF
DIRECT
Citoloģija	Uztriepes: krāsu imunofluorescence
Histoloģija	Šūnas patomorfoloģija
Struktūra	Embriju mikroskopija, imūnelektroniskā mikroskopija
Antigēnu noteikšana	IF, PIÉF, RIM, IFA
Antivielu vietējās produkcijas noteikšana	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Molekulārās bioloģiskās pieejas	Molekulārā hibridizācija, PCR

Herpes zoster vīrusa infekcijas laboratorijas diagnostika

Diagnostikas problēmas	Metodes	Paredzamie rezultāti
Akūta primārā infekcija	1	Atklāšana pēc 2 stundām
	2	Antivielu līmenis lēnām aug
	3	Pastāv 3 dienas pēc inficēšanās
Akūta atkārtotas infekcija	1	ULV noteikšana 2 stundu laikā
	2	Antivielu līmenis lēnām aug
	4	Pastāstiet 4 dienas pēc izsitumu parādīšanās

1. WIEF pūslīšu noteikšana šķidrumā;
2. seroloģija: DSC, ELISA, kuras mērķis ir identificēt
3. Seroloģija: ELISA, kura mērķis ir IgM noteikšana;
4. seroloģija: ELISA, kura mērķis ir IgA, IgM noteikšana.

Metodes infekcijas imūno reakcijas indikācijai herpes zoster vīrusa dēļ

Pieeja	Metode
Paaugstinātu antivielu titra noteikšana otrajā serumā	RSK, RTGA, RPGA, neitralizācijas reakcija IF, RIM, ELISA
IgG, Ig klases specifisko antivielu noteikšana pirmajā seruma paraugā	IFA, IF, RIM, lateksa aglutinācijas

Seroloģiskās izmeklēšanas rezultātu interpretācija attiecībā uz pacientu serumiem uz herpesvīrusu infekcijām (ELISA)

Infekcijas nosaukums / marķieris	Vidējie sliekšņi infekcijām
	Analīzes rezultāti	Interpretācija
Citomēdijas anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	Pozitīvs 1-6 Pozitīvs 6-10 Pozitīvs> 10 Negatīvs Pozitīvs 100-300 Negatīvs <90 Apšaubāms 90-100	Remisija Slimības pastiprināšanās Slimības akūtais fāze Nav infekcijas (slimība) Slimības akūtais fāze Atkārtojiet analīzi pēc 2-3 nedēļām
Herpes simple 1,2 serotipi Anti-HSV 1/2 kopā. (100-900%)	Pozitīvs 100-400 Pozitīvs 400-800 Pozitīvs> 800 Negatīvs <100	Remisija Slimības pastiprināšanās Slimības akūtais fāze Nav infekcijas (slimības)

Tabulā ir izklāstītas galvenās herpesvīrusu infekciju laboratorijas diagnostikas metodes, kā arī ieteikti bioloģiskie materiāli, kas tiek pārbaudīti HSV izdalīšanai, ņemot vērā herpisko bojājumu lokalizāciju

Uzticama ir herpes simplex un CMV izplatīšana, inficējot jutīgas šūnu kultūras. Tādējādi 26 slimnieku recidīvu virusoloģiskajā izmeklēšanā 23 gadījumos (88,4%) HSV tika izolēta jutīgā Vero šūnu kultūrā. Inficētajās kultūrās tika novērota HSV raksturīgā citopātiskā iedarbība - vairāku kodolu giganta šūnu veidošanās vai noapaļoto un paplašināto šūnu uzkrāšanās ķekaru veidā. 52,1% gadījumu pēc inficēšanās 16-24 stundu laikā bija iespējams noteikt vīrusa citopātiskās iedarbības foci. Inficēto kultūru inkubācijas 48-72 stundu laikā materiālu procentuālais daudzums, kas izraisa specifisku šūnu iznīcināšanu, pieauga līdz 87%. Un tikai 13% gadījumu pozitīvi rezultāti tika konstatēti 96 stundas pēc inficēšanās un vairāk vai ar atkārtotu pāreju.

Generalizētas herpes infekcijas laboratorijas diagnostikas metodes

Galvenās metodes, kuru mērķis ir identificēt herpesvīrusus, to daļiņas un to sastāvdaļas	Papildu metodes, kuru mērķis ir identificēt antivielas pret herpes vīrusiem bioloģiskajos šķidrumos, nosakot fermentatīvas izmaiņas asins serumā
Isolation of Herpes vīrusa uzņēmīgās šūnu kultūrām un dzīvnieku Direct un imūnās elektronu mikroskopijas Tiešā un netiešā imunoperoksidāzes metodes realizācijas variantus, tiešas un netiešas darbības fluorescējošo antivielu paņēmiens iespējas opcijas ELISA izgudrojuma realizācijas variantos molekulārās (DNA-DNA) hibridizēties polimerāzes ķēdes reakcija reakcija lateksa aglutinācijas	Neitralizācijas reakcija komplementa saistīšanas reakcija latekss salipināšana Netiešas fluorescējošo antivielu metode iemiesojumu Netiešas imunoperoksidāzes metode variants Realizētā ELISA metode imūns susināmais radiālu fiksāciju papildinājums metode noteikšana alanīna un aspartāta līmeņos

Lai diagnosticētu infekciozo mononukleozi (VEB izraisītu infekciju), tiek izmantotas seroloģiskās metodes. Reakcija Paul-Bunnelya ar aitas eritrocītu, titrs 1:28, diagnostikas un iepriekš par vienu mācību serumā, vai 4-kārtīgu antivielu palielinājums, kad tā izskata pārī serumus. Izmantojiet Goff-Bauer reakciju ar 4% formalizēto zirga sarkano asins šūnu suspensiju. Rezultāts tiek ņemts vērā pēc 2 minūtēm, bet infekciozais mononukleoze ir ļoti specifiska.

Pašlaik tiek izstrādāts enzīmu imunoloģiskais tests (ELISA), lai diagnosticētu infekciozo mononukleozi. Šajā gadījumā IgG un IgM antivielas pacienta serumā nosaka, inkubējot to ar EBV inficētām limfoblastiem, pēc tam apstrādājot ar fluorescējošām antivielām. Aktīvajā slimības periodā antivielas pret vīrusu kapīdu antigēnu nosaka titrā 1: 160 un vairāk.

Lietojot virkni importēto komerciālo testu sistēmās in IFA var identificēt: antivielas pret ant Egan EBV aplokšņu antivielu priekšlaicīgi antigēnu EBV, vispārējā antivielas pret agrīnā antigēnu EBV, ko nosaka akūtās fāzes slimības un kodolā un citoplazmā, un ierobežoto antivielu EBV sākumā, kas noteikts akūtās fāzes slimības un kodolā un citoplazmā šūnu, norobežo antivielas pret EBV sākumā antigēnu, ko nosaka vidū slimības tikai citoplazmā šūnu un antivielas uz EBV kodola antigēnu. šīs pārbaudes sistēmu izmantošana ļauj diferenciālanalīze vairākām slimībām, kas saistītas ar EBV.

Pēc pozitīva ELISA, lai identificētu antivielas EBV dod Immunoblot kas apstiprina reakciju, kas fiksē uz antivielu klātbūtni, lai atdalītu EBV marķierproteīnus (p-proteīni): P23, P54, p72 (klātbūtne proteīna liecina iespēju reprodukcijas EBV), p 138. Said Iepriekš minētās laboratorijas metodes tiek izmantotas, lai kontrolētu ārstēšanas efektivitāti.

Viroloģisko metožu jutība ir 85-100%, specifitāte ir 100%, studiju laiks ir 2-5 dienas. Bieži praksē tiek izmantota tiešās imunofluorescences (PIF) metode ar poliklonālām vai monoklonālām antivielām pret HSV-1 un HSV-2. UIF metodi var viegli reproducēt parastajā klīniskajā laboratorijā, tas nav dārgs, jutīgums pārsniedz 80%, specifiskums ir 90-95%. By imunofluorescējošo mikroskopijas atklāja klātbūtni citoplazmas ieslēgumi, morfoloģiskās pazīmes, procentos no inficētās šūnās, kas ir uztriepes, skrambām urīnizvadkanāla, dzemdes kakla kanālu, dzemdes kakla, taisnās zarnas.

UIF metode dod priekšstatu par šūnu morfoloģiskajām īpašībām un HSV antigēnu lokalizācijas izmaiņām. Papildus tiešām herpes vīrusu šūnu bojājuma pazīmēm (specifiskās luminiscences noteikšana), saskaņā ar UIF datiem pastāv netiešas herpes infekcijas pazīmes:

• kodolmateriālu agregācija, kariolmas lobīšana;
• tā saukto klātbūtni. Kodolu "caurumi", ja no šūnas kodola paliek tikai viena kariolemma;
• intranuclear inclusions - Caudry teļa klātbūtne.

Nosakot UIF ārsts saņem ne tikai kvalitāti, bet arī kvantitatīvu novērtējumu inficēto šūnu, kas mēs esam, ko izmanto, lai novērtētu efektivitāti pretvīrusu terapija ar aciklovīra (AC). Tādējādi 80 pacienti ar vienkāršu dzimumorgānu herpes (GG) tika pārbaudīti ar UIF metodi dinamikā. Ir pierādīts, ka, ja pirms ārstēšanas ar aciklovīrs ar uztriepes 88% pacientu bija liela daļa inficēto šūnu (50-75% un vairāk), pēc tam, kad vienā laikā aciklovīrs ar uztriepju 44% pacientu ar veselīgu šūnas konstatēti 31% gadījumu ir atzīmētas atsevišķas inficētās šūnas un 25% pacientu bija līdz 10% inficēto šūnu.

Inficēto šūnu saturs uztriepes (PIF reakcija) pacientiem ar dzimumorgānu herpes, kas ārstēti ar acikloviru

Slimības periodi	Procentuālā izteiksme
	Inficētās šūnas					Normālas šūnas
	Vairāk nekā 75%	50-75%	40-50%	10%	Viena šūna n / sp
Recidīvs (pirms ārstēšanas)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remisija (pēc ārstēšanas)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Izmantojot daudzu gadu UIF un dot-hibridizācijas metodi, gandrīz 100% gadījumu sakrita ar pētījuma rezultātiem. Jāatzīmē, ka, lai palielinātu uzticamību diagnozes GH, jo īpaši gadījumos, kad pastāv subklīnisku un malomanifestnyh formas herpes, ieteicams lietot 2-3 metodi laboratorijas diagnostiku, it īpaši, ja pārbaudot grūtnieces, sievietes ar dzemdniecības vēsturi maznodrošinātajiem iedzīvotājiem, cilvēkiem ar nenoteiktu ginekoloģiska diagnozi.

Tādējādi, PCR diagnosticēšanai vīrusu un baktēriju infekcijas, uroģenitālā trakta, ir nepieciešams, lai novērtētu pozitīvus rezultātus, kas iegūti ar vēsturē, klātbūtnē (vai neesamību) specifiski klīniski simptomi. Ja hlamīdiju atklāj ar PCR, tad šajā gadījumā ir iespējams runāt par infekciju un attiecīgi atrisināt terapijas problēmas. Gadījumā, ja konstatēšanas mikoplazmām (ureaplasmas) ir patogēni, lai apstiprinātu diagnoze ir vajadzīga, lai veiktu kultūras papildu pētījumus, t. E. Crop materiāls no pacientam jutīgs pret šūnu kultūrām. Tikai tad, ja kultūras analīzē tiek iegūti pozitīvi rezultāti, mēs varam runāt par laboratorijas apstiprinājumu mikoplazmozes diagnostikai. Tāda pati metode vajadzības gadījumā ļaus noteikt izolēto mikoplazmas jutību pret bieži lietojamām zāļu formām (antibiotikas, fluorhinoloni utt.).

Varbūt vienpakāpes infekcija ar vairākiem Nepresviridae dzimtas vīrusiem. Bieži mēs atklājām vienu pacientu ar HSV-1, HSV-2 un CMV vīrusu infekciju. Daudz biežāk inficējušies ar vairākiem herpes vīrusiem bija pacienti ar sekundāro IDS klīniskām un laboratoriskām izpausmēm (pacienti ar onkohematoloģisko, onkoloģisko, HIV inficēto). Tādējādi tiek parādīts, ka klīniskās un imunoloģiskās problēmas, kas attīstās ar HIV infekciju, kopā ar molekulārās hibridizācijas rezultātā konstatētā herpesvīrusu skaita palielināšanos. Šajā prognostiski nozīmīgākajā gadījumā var uzskatīt HSV-1, CMV un HHV-6 tipa DNS kompleksu vienpakāpes noteikšanu.

[1], [2], [3]