Raksta medicīnas eksperts
Jaunas publikācijas
PCR kā ģenētisko slimību diagnostikas metode
Pēdējā pārskatīšana: 23.04.2024
Visi iLive saturs ir medicīniski pārskatīts vai pārbaudīts, lai nodrošinātu pēc iespējas lielāku faktisko precizitāti.
Mums ir stingras iegādes vadlīnijas un tikai saikne ar cienījamiem mediju portāliem, akadēmiskām pētniecības iestādēm un, ja vien iespējams, medicīniski salīdzinošiem pārskatiem. Ņemiet vērā, ka iekavās ([1], [2] uc) esošie numuri ir klikšķi uz šīm studijām.
Ja uzskatāt, ka kāds no mūsu saturiem ir neprecīzs, novecojis vai citādi apšaubāms, lūdzu, atlasiet to un nospiediet Ctrl + Enter.
PCR ir jauns sasniegums molekulārajā ģenētikā, ko izmanto DNS amplifikācijai, un ļauj konkrētai DNS daļai (proti, jebkuram interesējošam gēnam) ātri atkārtot in vitro vairāk nekā 200 000 reizes. Lai veiktu reakciju, pietiek ar vienu šūnu DNS materiālu; PCR amplitīvā DNS daudzums ir tik liels, ka šo DNS var vienkārši iekrīt (izmantojot radioaktīvās zondes pēc elektroforēzes nav nepieciešams). Priekšnosacījums PCR veikšanai ir zināšanas par amplificētās DNS daļas nukleotīdu sekvenci pareizai mākslīgi sintezētu primeru izvēlei.
Pašlaik PĶR ir process, kas notiek vienā caurulē un sastāv no atkārtotas ciklu palielināšanas (reprodukcijas, kopija) par īpašiem DNS secības, lai iegūtu pietiekami lielu daudzumu kopiju, ko var noteikt ar elektroforēzi. Viens būtisks elements reakcija - "gruntskrāsas" - sintētiskie oligonucleotides, kas sastāv no 20-30 bāzes papildu "Sites" (zonās) rūdīšanas (savienojums) uz identificējamu daļu DNS matricas.
PCR tiek automātiski ieprogrammēts programmējamā termostatā - termociklis (termociklisks). Trīspakāpju cikls, kura rezultātā tiek iegūtas veidlapas DNS identificējamās daļas precīzas kopijas, tiek atkārtoti 30-50 reizes saskaņā ar termociklaera iepriekš iestatīto programmu. Pirmajā ciklā oligopramēri hibridizējas ar oriģinālo veidnes DNS, un pēc tam (nākamajos ciklos) un ar nesen sintezētām DNS molekulām, jo tās uzkrājas reakcijas maisījumā. Pēdējā gadījumā DNS sintēze nebeidzas temperatūras režīma izmaiņu dēļ, bet pēc amplitīvā reģiona DNS polimerāzes robežas sasniegšanas, kas nosaka neseno sintezēto DNS reģionu lielumu vienā nukleotīdā.
Kā iegūto DNS molekulu noteikšanas metodi tiek izmantota elektroforēze, ar kuras palīdzību pastiprinātais materiāls tiek sadalīts atkarībā no amplikonu lieluma (amplifikācijas produkti).
Ar PCR palīdzību ir iespējams tieši izpētīt iespējamo mutāciju vai polimorfisko vietu lokalizācijas vietas, kā arī izpētīt citu DNS īpašo iezīmju klātbūtni.
[