Hemoblastožu imūnfenotipēšana

Ievērojams progress hematoloģisko saistītos pētījumos pēdējos gados, izmantojot mūsdienu imunoloģiskas metodes un automatizētās instrumentus analīzei un šķirošanas šūnas perifērās asinīs un kaulu smadzenēs - plūsmas cytometers. Tradicionālā un morfoloģija cytochemical pētījums substrāta šūnu slimība (asins, sarkana kaulu smadzeņu, limfmezglu, liesas utt), daudzos gadījumos, it īpaši limfoproliferatīvo slimībām, neatklāj visu dažādas iespējas starp morfoloģiski līdzīgas formas un noteikt izcelsmi patoloģiskā klons . Šīs problēmas var atrisināt tikai, pētot šūnu imunoloģiskās īpašības. Katrs diferenciācijas asinsrades šūnu posmam ir savs noteikts antigēnu, kas ir par starptautisko klasifikāciju, kas pazīstama kā diferenciāciju un diferenciācija ir sadalīti grupās, izraudzīta CD.

At block diferenciācijas jaunveidojumu var notikt jebkurā stadijā normālas šūnas attīstību, kā rezultātā patoloģiskā šūnu klonu definējot substrāta slimības un ar tādu pašu imunoloģiskā (vai fenotipiskie) īpašība. Pēc tam, kad pētījums no šīm atzīmēm šūnās var noteikt, jebkurā veidā vai iemiesojumu slimības ir saskaņota, t.i., pamatojoties imunoloģiskās šūna fenotips diferenciāldiagnostikas, kas ir visgrūtākais limfoproliferatīvo slimību, jo galvenais šūna substrātu patoloģiskie slimības ir gandrīz tāda paša tipa šūnām morfoloģiska.

Fenotipizācija ļauj izmantot monoklonālās antivielas raksturo blastic šūnas un nobriedušu mieloīdas asinis, mono-, limfocitāras sēriju klātbūtnē diferenciācijas antigēnu (receptoros) šūnu sieniņām. Sadaļā "Organisma imūnsistēmas novērtējums" ir daļēji aprakstīts šūnu marķieru īpašības un diagnostiskā nozīme; Zemāk ir īss apraksts par antigēnu šūnu marķieriem, kas tiek lietoti hemoblastozes diagnostikai. Uz asins šūnu membrānām un sarkano kauliņu smadzenēm var identificēt šādus antigēnus (marķierus).

• CD2 ir monomērisks transmembrains glikoproteīns. Tas atrodas uz visu cirkulējošo T-limfocītu un dažu NK-limfocītu virsmas. CD2 piedalās T-limfocītu alternatīvas aktivācijas procesā. CD2 noteikšana, izmantojot monoklonālas antivielas klīniskajā praksē, tiek izmantota akūtu T šūnu leikēmiju, limfomu, hronisku iekaisuma un imūndeficītu apstākļu fenotipēšanai.
• CD3 - olbaltumvielu komplekss, kas saistīts ar antigēnu specifisko T šūnu receptoru, ir galvenais T-limfocītu funkcionālais marķieris. Tas atvieglo aktivācijas signāla pārnesi no membrānas uz šūnas citoplazmu. CD3 noteikšana ir indicēta akūtas T šūnu leikēmijas, limfomas (CD3 nav izteikta ne-T-šūnu limfoīdo audzēju) un imūndeficīta slimību diagnozē.
• CD4 - transmembrānu glikoproteīns, kas izteikts ar apakšgrupā T palīga (indukcijas), kas veido 45% no perifēro asiņu limfocītu. In sākumposmos limfocītu attīstības aizkrūts dziedzeris, CD4 antigēni, kā arī CD8, izteica visu garozas limfocītiem. Serdes thymocytes, kas ir līdzīga fenotipu nobriedušu CD4 + perifēro asiņu T-šūnu (palīgs T šūnas), vai nu jau izteikt CD4 vai CD8 receptorus. Perifērās asinīs līdz 5% šūnu tiek vienlaikus marķēti ar CD4 un CD8. Dažu monocītu šūnās ir neliela CD4 izpausme. CD4 izsaka vairumā gadījumu, T šūnu limfomu, ieskaitot Mycosis fungoides, un in HTLV-saistīta T šūnu leikēmija (HTLV - cilvēka T-limfotropo virus - Human T-limfotropo virus).
• CD5 - viengabala glikoproteīns, kas klāt uz visiem nobriestiem T-limfocītiem un lielākajai daļai timocītu, ir vāji izteikts ar B limfocītu. CD5 tiek konstatēts B-šūnu hroniskas limfoleikozes un centrociālas limfomas neoplastiskajās šūnās. Citos ļaundabīgo limfātisko slimību veidos - folikulāra limfoma, matašā leikēmija, lielas šūnu limfomas - CD5 nav izteikta.
• CD7 ir vienvērtīgs proteīns, agrākais T šūnu diferenciācijas marķieris. To izsaka pro-T-limfocīti pat pirms migrācijas uz aizkrūts dziedzeru. CD7 ir konstatēta lielākajā daļā NK šūnu, monocītos ir novērota vāja izpausme. B-limfocīti un granulocīti nesatur šo antigēnu. CD7 definīciju izmanto limfomu, bērnu T-šūnu limfoblastiskās leikēmijas diagnostikai.
• CD8 ir proteīns, kas sastāv no divām polipeptīda ķēdēm, kuras saistītas ar disulfīdu tiltiem. To izpaužas citotoksisku un supresoru T limfocītu subpopulācijā, kas veido 20-35% perifēro asiņu limfocītu. Šim antigēnam ir arī NK limfocīti, kortikālie timociti, 30% medulāru timocītu un sarkano kaulu smadzeņu šūnu subpopulācija. CD8 pārbauda, lai kvantitatīvi novērtētu T-supresoru saturu (sk. Sadaļu "T-limfocītu slāpētāji asinīs").

• CD10 ir endopeptidāze, kas saistīta ar šūnu membrānu. CD10 izsaka jaunus B limfocītu formas un kortical limfocītu subpopulāciju. CD10 izsaka visas ALL šūnas.
• CD11c ekspresijas makrofāgi, monocīti, granulocīti, NK šūnas un matu šūnu leikēmijas šūnas šūnu membrānā.
• CD13 ir glikoproteīns, ko izsaka mielomonocītu šūnas (progenitoru šūnas, neitrofīli, basofili, eozinofīli, monocīti un mieloīdo leikozes šūnas). Tas nav T un B limfocītos, eritrocītos un trombocītos.
• CD14 ir virsmas membrānas glikoproteīns. To galvenokārt izraisa monocīti un makrofāgi. CD14 tiek atklāts vairāk nekā 95% perifēro asiņu un kaulu smadzeņu monocītu. Smagā CD14 ekspresija tiek novērota akūtas mieloblāzijas leikēmijas gadījumā. Akūtās un hroniskās limfoblastiskās leikozes gadījumā šis antigēns nav izteikts.
• CD15 ir oligosaharīds. Viņš piedalās fagocitozes un hemotaksīzes procesos. Šis antigēns atrodas nobriedušu granulocītu un Berezovskas-Šternberga šūnu virsmā. Hodžkina slimība ir konstatēta CD15 antigēna izpausme. Ne-Hodžkina limfomas gadījumā CD15 vairumā gadījumu nav konstatēts.
• CD16 izsaka uz granulocītu, monocītu, makrofāgu un NK šūnu virsmas. Visi šī antigēna ekspresijas limfocīti ir spējīgi ietekmēt antivielu atkarīgo šūnu citotoksicitāti. CD16 nosaka, rakstot hroniskas mielocikālās leikēmijas, lai raksturotu NK šūnas.
• CD19 ir glikoproteīns, kas sastopams visos perifēro B limfocītos, kā arī visos B šūnu prekursoros. Tas nav plazmas šūnās. Šis ir agrākais B-šūnu marķieris, kam ir nozīmīga loma B-limfocītu aktivācijas un proliferācijas regulēšanā. CD19 ekspresē uz visām B-šūnu akūtas leikēmijas neoplastiskajām šūnām, un tā ir sastopama arī dažu akūtas monoblastās leikēmijas formās.
• CD20 ir glikozilēts proteīns. B-limfocītu ontogenezē CD20 antigēns parādās pēc CD19 limfocītu pirms B-šūnu diferenciācijas. Tas nav plazmas šūnu plazmas membrānā. Tas tiek ekspresēts ALL, B-šūnu hroniskā limfoleikozes, matau šūnu leikēmijas, Burkitta limfomas un ļoti reti akūtas monoblastās leikēmijas gadījumā.
• CD21 ir glikoproteīns, ievērojamā daudzumā atrodas B limfocīti limfātiskajos orgānos un nelielā daudzumā perifērās asins B-šūnās. CD21 ir Epstein-Barr vīrusa receptors.
• CD22 ir proteīns, kas sastāv no divām polipeptīda ķēdēm. Tas tiek izteikts uz lielāko daļu B-limfocītu, ieskaitot cilmes šūnu (prolimfocītu) membrānu. Pēc aktivēšanas antigēns netiek ekspresēts uz B limfocītiem (plazmas šūnām). Visizteiktākā CD22 ekspresija tiek konstatēta šūnās ar matains šūnas leikēmiju, vājiem - mieloīdo leikēmiju un ne-T-šūnu ALL.
• CD23 ir glikoproteīns, kas izteikts ar perifērisko asiņu aktivēto B limfocītu ekspresiju daudz lielākā mērā. CD23 mediē IgE atkarīgu citotoksicitāti un fagocitozi ar makrofāgiem un eozinofiliem.
• CD25 ir vienas ķēdes glikoproteīns, kas identificēts kā IL-2 ar zemu afinitātes receptoru. Šo receptoru izsaka aktivētos T-limfocītos un, mazākā blīvuma gadījumā, aktivētās B-šūnās. Veselu cilvēku perifēriskajās asinīs antigēns ir sastopams vairāk nekā 5% limfoīdo šūnu.
• CD29 ir fibronektīna receptors. Tas plaši izplatās audos, to izsaka leikocīti. CD29 noteikšana perifērās asins šūnās tiek izmantota, lai tipizētu T-šūnu subpopulāciju ar CD4 + CD29 + fenotipu, kurus sauc par 2. Tipa helperu (Th2). Šīs šūnas, ražojot limfokīnus, piedalās humorālās imūnās atbildes veidošanā.
• CD33 ir transmembrānais glikoproteīns. Tas atrodas uz mieloīdu un monocītu sēriju šūnu virsmas. To konstatē monocītu un mazākā mērā perifēro asiņu granulocītu virsmā. Aptuveni 30% no sarkano kaulu smadzeņu šūnām izstaro CD33, ieskaitot mieloblastus, promjelocītus un mielocītus. Antigēna nav pluripotentu cilmes šūnu membrānās. CD33 tiek izmantots, lai raksturotu šūnas mieloīdo leikēmiju. Limfu un eritroīdu izcelsmes leikēmijas šūnas neizpauž CD33.
• CD34 ir fosfoglikoproteīns, ko izraisa asinsrades cilmes šūnas, tostarp monopotences cilmes šūnas. Visvairāk izteikta Ar izpausme vērojama agrīnā progresijā; kad šūnas nogatavojas, marķiera izteiksme nokrīt. CD34 ir atrodams arī endotēlija šūnās. CD34 izmanto, lai raksturotu šūnas akūtās mielogēno un limfoblastisko leikozes formās. Ar hronisku limfoleikozes leikēmiju un limfomas, CD34 antigēna ekspresija nav konstatēta.

• CD41a izpaužas trombocītu un megakariocitu veidā. Megakariblozes leikēmijas diagnosticēšanai izmanto monoklonālās antivielas, lai noteiktu CD41a. Ar Glązmann trombastēniju šī antigēna ekspresija nav vai būtiski tiek nomākta.
• CD42b ir membrānas glikoproteīns, kas sastāv no divām polipeptīda ķēdēm. Marķieris atrodas trombocītu un megakariocitu virsmā. Klīniskajā praksē, lai noteiktu trombocitopātiju - Bernard-Soulier sindromu, izmanto CD42b noteikšanu.
• CD45RA pieder pie transmembranālo glikoproteīnu klases. Tas ir kopējs leikocītu antigēns. Tas izpaužas uz B limfocītu šūnu membrānām, mazākā mērā T-limfocītiem un nobriedušiem medulāriem timocītiem. Marķieri nav izteikti granulocītos.
• CD45RO ir mazas molekulmasas CD45RA izoforma - bieži sastopama leikocītu Ag. Tās atrodamas T-šūnās (atmiņas T-limfocīti), B-limfocītu subpopulācijās, monocītos un makrofāgos. Monoklonālās antivielas pret CD45RO mijiedarbojas ar vairumu timocītu, CD4 + un CD8 + T limfocītu atpaliekošu subpopulāciju un nobriedušām aktivētām T šūnām. Šim antigēnam ir arī mielomonocitārās izcelsmes šūnas, granulocīti un monocīti. Tas tiek konstatēts centroblastiskajās un imūnoblastiskajās limfomās.
• CD46 - O-glikozilētais dimezs. Tā ir plaši izplatās audos un pauda T un B limfocītu, monocītu granulocītu, NK-trombocīti, endotēlija šūnu, fibroblastu, bet nav klāt uz virsmas eritrocītu. CD46 nodrošina audu aizsardzību no papilddarbības.
• CD61 ir trombocītu antigēns. Tas izpaužas perifērisko asiņu un sarkano kauliņu smadzeņu trombocītos, kā arī megakariociņos un megakaroblastos. Tās definīcija tiek izmantota kā akūta megakariboblokāžas leikēmijas marķieris. Pacientiem ar Glanzmans trombasteniju pacientiem ar antigēna ekspresiju rodas vai nomāc.
• CD95, ko sauc arī par Fas vai APO-1, ir transmembrānais glikoproteīns, kas ir audzēja nekrozes faktora receptoru grupas ģimenes loceklis. Tas tiek izteikts ievērojamos daudzumos T-limfocītu perifērās asinīs (CD4 + un CD8 +) un mazākā mērā B limfocītiem un NK šūnām. Šo antigēnu izpaužas arī granulocītos, monocītos, audu šūnās un neoplastiskās šūnās. CD95 saistīšanās ar Fas ligandu (CD95L) inducē apoptozi šūnās.
• CD95L vai Fas ligands, membrānas proteīns, kas pieder audzēja nekrozes faktora receptoru grupai. Šo antigēnu izraisa citotoksiskie T limfocīti, NK šūnas un ļoti bieži audzēja šūnas; galvenais apoptozes ierosinātājs šūnās.
• HLA-DR ir galvenā cilvēka histoloģisko savietojamības kompleksa (HLA) II klases monomorfāmais determinants. Atzīme ir izteikts uz Langerhansa šūnām, dendrītiskajās šūnās limfoīdo orgānu, un dažu veidu makrofāgu, B limfocīti, aktivēti T šūnu un aizkrūts epitēlija šūnas. Šo marķiera testu izmanto, lai skaitliski noteiktu aktivētos T-limfocītus ar fenotipu CD3 + HLA-DR +.

Izmantojot dažādu monoklonālo antivielu izvēli marķieriem, ir iespējams izveidot fenotipisku šūnu portretu, kas raksturīgas noteiktai leikēmijas formai.

Bez tam, izmantojot immunophenotyping metodes, diagnostikas un diferenciāldiagnostikas ļaundabīgas hematoloģiskas slimības, īpaši svarīgi pagriezuši izmantošanu ārstniecības procesu, lai novērtētu stāvokli remisijas un atlikušo iedzīvotāju leukemic šūnām. Zinot fenotipa "portretu" blastu šūnu periodā diagnozes, ar šiem marķieriem var atrast šūnu leukemic klons remisijas, un no to skaita pieaugumu - prognozēt attīstību recidīvs garš (par 1-4 mēnešiem), līdz tās klīniskās un morfoloģiskās īpašības.

[1], [2], [3], [4],