Nabassaites asiņu gūžas cilmes šūnas

Virzuļa asinis darbojas kā hematopoētisko cilmes šūnu avots asinsrades šūnu proliferācijas potenciālam un atkārtošanās spējai. Vairākkārt ir parādīts, ka nabas vada asiņu laikā piegādes brīdī ir pietiekami daudz slikti apgrūtinātu hematopoētisko cilmes šūnu. Daži autori uzskata, ka nabassaites asiņu transplantācijas priekšrocība ir tāda, ka nav nepieciešams meklēt donoru, kas ir saderīgs ar HLA antigēniem. Saskaņā ar tiem, nenobriedušu zīdaiņa imūnsistēmu cēloņiem samazināta funkcionālo aktivitāti imūnkompetentajām šūnas, un tādējādi zemāks nekā kaulu smadzeņu transplantācijas, saslimstība ar smagu reakcijas "transplantāts pret uzņēmēja". Šajā šūnu transplantāta izdzīvošanu nabas saites asins ir ne mazāks par kaulu smadzeņu šūnu, pat tad, ja tiek izmantots mazāku skaitu GSK administrē uz 1 kg pacienta ķermeņa masu. Tomēr, mūsuprāt, optimālais jautājumu skaits pārstādīt nepieciešami efektīvai iemājot organismā saņēmēja, imunoloģiska saderību, kā arī vairākiem citiem aspektiem transplantācijas asinsrades cilmes šūnu nabassaites asins prasa nopietnāku analīzi nabassaites asins šūnas.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Nabassaites asiņu transplantātu asinsrades cilmes šūnu iegūšana

Par iegūšanas asinsradi cilmes šūnas no nabassaites asiņu procedūra prasa savu devu tūlīt pēc piedzimšanas un tās atdalīšana no placentas, kad placenta ir dzemdē vai ex dzemdē, kā arī par ķeizargriezienu, bet arī ex dzemdē. Ir pierādīts, ka gadījumā, saīsināt laiku no dzimšanas līdz jaundzimušo ar placentas atdalīšanas līdz 30 sekundēm apjoms nabassaites asins iegūti palielinās vidēji par 25-40 ml. Ar vēlāku procedūru zaudē tādu pašu asiņu daudzumu. Ir konstatēts, ka bērna agrīna atdalīšana no pēcdzemdībām nerada negatīvas sekas jaundzimušajiem.

Krievijas pētniecības institūts Hematoloģijas un asins pārliešanas izstrādātas efektīvas un zemu izmaksu tehnoloģijas gan nabassaites asinīm pie fizioloģiskajām ciltskoks ((70.2 + 25.8) ml) un cesarean sadaļā ((73.4 + 25.1) ml). Metode atdalīšanai nabas saites asins ar pietiekami augstu ražu mononukleāriem un kodolu - (83.1 + 9.6) un (83.4 + 14.1)%, attiecīgi. Uzlabots metode kriokonservācijas nabassaites asiņu, kas nodrošina augstu drošību mononukleāro šūnu un CFU-GM - (96,8 + 5,7) un (89.6 + 22.6)%, attiecīgi. No drenāžas vadu asins parauga ņemšanas metodi, izmantojot konteineru "Kompoplast-300" (Krievija) efektivitāte. Sētas vads asins autori veikta tūlīt pēc piedzimšanas un tās atdalīšana no placentu ziņā izvietojot placentu dzemdē vai ex dzemdē. Pirms punkcijas nabas vēnu nabas saites vienreiz ārstēti ar 5% tinktūra joda, un pēc tam divas reizes - 70% etilspirta. Asins caur spiedieniem spontāni plūda uz konteinera. Žoga ilgums bija ne vairāk kā 10 minūtes. 66, kas savākti drenāžas tilpums metode nabas asins paraugus vidēji (72 + 28) ml, un skaits leikocītu paraugā vidēji pilna - (1,1 + 0,6) x x 107. Nabas saites asins sterilitātes (bakteriālā piesārņojuma analīze, HIV-1 vīrusu hepatītu B un C, sifilisa, un citomegalovīrusa infekcijas) tikai vienā paraugā tika konstatētas IgG antivielas pret C hepatīta citā pētījumā vienreiz placentas pēc piedzimšanas augļa virsmas tika novietota uz īpašu rāmi lejup, vads tika ārstēti ar 5% nātrija jods un 75% etils th spirts. Nabassaites vēnas tika nosusinātas ar adatu no pārliešanas sistēmas (G16). Asinis iztecēja traukā spontāni. Šādā veidā ņemtā asins tilpums vidēji (55 + 25) ml. Papīra G. Kogler et al (1996) saites asins ņemti slēgta veids un iegūst lielu daudzumu asinīs - vidēji (79 + 26) ml. Autori atzīmē, ka starp 574 vadu asins paraugi satur aptuveni 7% mazāk nekā 40 ml asiņu, kas neļauj tos izmantot transplantācijai. K. Isoyama et al (1996), ņemot nabassaites asinis aktīvā exfusion izmantojot šļirces, saņēma vidēji 69.1 ml asiņu (nabassaites asiņu apjoms svārstījies no 15 līdz 135 ml). Visbeidzot, A. Abdel-Mageed PI līdzstrādniekiem (1997) by punovinnoy vēnu katetrizācijas tika iegūti vidēji 94 ml saites asins (no 56 līdz 143 ml).

Lai samazinātu risku jatrogēnu infekcijas un piesārņojums ar mātes sekrēti attīstīto slēgtā sistēma asins savākšanu, pamatojoties uz plaši izmanto transfuzioinoy sistēmas Baxter Healthcare Corp., Deerfield, IL (USA), kas satur 62,5 ml CPDA (citrāts-fosfāts-dekstroze ar adenīna) kā antikoagulants. Par ražo materiāla tehnoloģija ir īpaši svarīga nozīme, lai sagatavotu kvalitātes parauga attiecībā pret informācijas daudzumu un tīrību šūnu suspensijas. No esošajām metodēm nabassaites asins savākšanas, kotoryeuslovno klasificēti slēgta, daļēji atklātas un atvērtas sistēmas sleduetotdavat izvēli, pirmkārt, kā slēgtā sistēmā ievērojami samazina mikrobioloģiskā piesārņojuma risks materiāla, kā arī piesārņojumu šūnu apturēšanas mātes šūnas.

A. Nagler un līdzautori (1998) veica visu triju nabassaites asiņu paraugu ņemšanas sistēmu efektivitātes salīdzinošo analīzi. Pirmajā variantā procedūra tika veikta slēgtā sistēmā, izvadot asinis tieši tvertnē. Otrajā variantā nabassaites asinis iegūtas ar šļirču aktīvās asiņu izšļakstīšanas metodi1, turpinot plakanās vēnu mazgāšanu un vienlaicīgu asiņu nosusināšanu konteinerā (atvērtā metode). Trešajā variantā asinis tika atdalītas daļēji atvērtā sistēmā, aktīvi to ekstrahējot ar šļirces un mazgājot caur nabassaites artēriju, vienlaicīgi izplūstot tvertnē. Pirmajā versijā autori saņēma nabas saites asiņu apjomu (76,4 + 32,1) ml ar leikocītu skaitu (10,5 + 3,6) x 10 ⁶ uz 1 ml asiņu. Otrajā variantā attiecīgie rādītāji bija (174,4 + 42,8) ml un (8,8 + 3,4) x 10 ⁶ / ml; trešajā - (173,7 + 41,3) ml un (9,3 + 3,8) x 10 ⁶ / ml. Izmantojot atvērtās sistēmas, tika konstatēts visbiežākais nabassaites asiņu paraugu infekcija. Tika noteikta tieša korelācija starp placentas masu un iegūtās asins tilpuma daudzumu - ar pieaugošu placentas masu, savākto asiņu daudzums palielinās.

Pēc nabassaites asiņu paraugu ņemšanas separācijas solis seko mononukleāro šūnu izolēšanai un šūnu suspensijas attīrīšanai no eritrocītiem. Eksperimenta apstākļos nukleušās šūnas tiek izdalītas ar to sadedzināšanas metodi ar metilcelulozi amonija eritrocītu lizēšanas laikā ar hlorīdu. Tomēr klīniskos nolūkos metilcelulozi nevajadzētu lietot, jo asinsrades cilmes šūnu zudums sasniedz 50-90%. Lizēšana sarkanās asins šūnas, kas saistīti ar lieliem apjomiem darba risinājumu klīnikā arī diez veiktas, lai gan procentuāli atdalīšanas šādā veidā kodoli šūnas ar fenotipu CD34 +, un cilmes šūnu CFU-GM funkcijas un CFU-GEMM ievērojami lielāks. Ir ziņots par jaunu līdzekli mononukleāro šūnu izolēšanai blīvuma gradienta pircēja blīvuma šķīdumā (BDS72). Šai vielai ir šādi fizioloģiskie parametri: pH - 7,4, osmolalitāte - 280 mosm / kg, blīvums - 1,0720 g / ml. Pēc autoru domām, ar tās palīdzību ir iespējams izolēt līdz 100% CD34 pozitīvo šūnu un noņemt 98% sarkano asins šūnu. Tomēr klīnika vēl nepiemēro BDS72.

Atdalīšanas metodes testē kodoli šūnas no nabas saites asins parasti izmanto 10% HES šķīdumu vai 3% želatīna šķīdumu. Efektivitāte nogulsnēšanu eritrocītu un izolē kodoli šūnas abos gadījumos ir aptuveni vienāds. Tomēr, ja izmanto kā sedimenting aģentu želatīnu iespējamo, lai iegūtu nedaudz lielāku skaitu CFU-GM, nekā tad, ja izmanto HES. Tiek pieņemts, ka atšķirība atgūšanas efektivitātes CFU-GM nevienlīdzīgā ātruma dēļ nogulsnēšanos atsevišķu frakciju vai kodoli šūnu spēju HES molekulas absorbējas uz asinsrades šūnas virsmas receptoriem un tādējādi bloķē to jutīgumu pret koloniju stimulējošu faktoru, kas tiek izmantoti, kad kultivējot CFU-GM in vitro. Tomēr gan sedimenter var būt piemērots izolācijai kodolaino šūnu veidošanā liela mēroga nabassaites asiņu bankām.

Nabassaites asiņu atdalīšanas un krioprepresēšanas metodes principā neatšķiras no tām, ko izmanto darbā ar pieaugušo donoru perifēro asiņu un kaulu smadzeņu asinsrades cilmes šūnām. Bet, sagatavojot lielu skaitu nabassaites asiņu paraugu savām bankām, atdalīšanas metodēm vispirms jābūt zemām izmaksām. Tādēļ tagad, diemžēl, klīniskajām vajadzībām jau tiek izmantotas parastās nabassaites asinsķermenīšu izolēšanas un kriobesizsardzības metodes, un eksperimentētāju partija paliek efektīvāka, bet finansiāli efektīvas metodes.

Kopumā vērtēšanas kritērijus izveidota sevi asinsradi šūnu skaits prasības un ar pētījumu nabassaites asins paraugus, lai noteiktu infekcijas izraisītājus. Lai aizsargātu asinsrades transplantēt nabassaites asins šūnu, veseli asins paraugi jāizmeklē galvenokārt uz ko hematogenous transmisīvajām infekcijām, un ģenētisku slimību. Daži autori iesaka papildu īpašas metodes pētījuma nabassaites asiņu nolūkā ģenētiskas slimības, piemēram, talasēmiju un sirpjveida šūnu anēmija, Adenozīndezamināze deficīts, agammaglobulinēmiju Bruton, slimību Harlera un laivas stūmējs diagnosticēšanai.

Saskaņā ar ieteikumiem Ticheli L. Et al (1998), katrā paraugā nabassaites asiņu ir nepieciešams, lai noteiktu, cik kodolaino šūnas, SB34-pozitīvo šūnu un CFU-GM, HLA-rakstīt, lai noteiktu asins grupu ABO un Rh tās biedru. Bez tam, seeding tiek veikta bakterioloģisko seroloģisko testu uz HIV un CMV infekciju, HBsAg, C hepatīta, HTLY-I un HTLV-II (T-šūnu leikēmijas, cilvēka), sifilisa, toksoplazmoze. Obligāta ir polimerāzes ķēdes reakcija pret citomegalovīrusu un HIV infekciju.

Procedūra pati saņem nabassaites asinis ir jāveic stingrā saskaņā ar principiem medicīnas bioētiku. Pirms asinsrades sākuma ir nepieciešams iegūt grūtnieces piekrišanu tās ieviešanai. Iepriekšēja saruna ar grūtniecei iegūtu apzinātu piekrišanu, lai veiktu visus manipulācijām, jo asinis exfusion uzpildīšana un apdares dokumenti tiek veikta tikai veselības aprūpes speciālistiem. Jebkurā gadījumā par nepieņemamu veic kādu no šīm procedūrām, ko personāls ar bioloģisko, ķīmisko, farmaceitisko un citu ne-medicīnisko izglītību, ņemot vērā pārkāpjot noteikto normu bioētikas un cilvēktiesību jomā. Par Pozitīvi pārvadātāju HBsAg, antivielas pret ierosinātāju C hepatītu, HIV un sifilisu nabassaites asiņu nav pieņemts, un savākto asins paraugi jau ir jāizmet un iznīcina. Jāatzīmē, ka pārvadāšana latentu infekciju jaundzimušajiem ir daudz retāk nekā pieaugušajiem, tādēļ varbūtība hematogenous nodošanu un attīstību infekcijas komplikāciju hematopoētiskām uzlējumi nabassaites asins šūnu ir ievērojami mazāks nekā gadījumā transplantāciju kaulu smadzeņu no pieaugušo ziedotājiem.

Svarīgs punkts piemērošanas nabassaites asiņu klīnikā ir novērtējums par transplantāta, kas ir balstīta uz kvantitatīva uz asinsrades cilmes šūnu paraugu nabassaites asins šūnu un devām, kas nepieciešami transplantācijas. Vēl nav izstrādāti standarti optimālam transplantācijai nepieciešamo nabas saites asiņu šūnu skaitam. Nav vispārpieņemta viedokļa pat par tādiem ikdienas parametriem kā CD34 pozitīvo šūnu un CFU-GM daudzums. Daži autori novērtēja potenciālu asinsrades šūnas, analizējot ilgtermiņa kultūru ar satura noteikšanu koloniju veidojošo vienību kopīgajām uz granulocītu, eritrocītu, monocītu un megakariocītu - CFU-GEMM.

Tomēr klīniskajos apstākļos nabassaites asiņu transplantācijas standarta novērtējums parasti ietver tikai kodēto vai mononukleāro šūnu skaita noteikšanu.

Nabassaites asiņu smadzeņu šūnu uzglabāšana

Dažas problēmas pastāv hematopoētisko nabassaites asiņu šūnu uzglabāšanas tehnoloģijā. Kad uzglabāšana zemā temperatūrā un asinsrades cilmes šūnas, lai panāktu to optimālu sasaldēšanas režīms ir minimizētu nabassaites asiņu un sarkano asins šūnu iepriekš noņemtas, lai izvairītos hemolīzi un risku nesaderības reakcijas antigēniem (ABO, Rh). Šiem nolūkiem ir piemērotas dažādas nukleušo šūnu izdalīšanas metodes. Jo sākumā 90 no pagājušā gadsimta visplašāk lietotā metode atdalot kodoli šūnas blīvuma gradientu, pamatojoties uz Ficoll ar blīvumu 1.077 g / ml, vai caursūkšanos ar blīvumu 1,080 g / ml. Atdalīšana nabassaites asiņu pēc blīvuma gradientu ļauj izvēlēties pārsvarā mononukleāri šūnas, bet gan rada ievērojamus zaudējumus asinsrades cilmes šūnu - līdz 30-50%.

Hidroksietila cietes sedimentācijas efektivitāte nabas saites asiņu šūnu izolēšanas procesā tiek novērtēta dažādos veidos. Daži autori norāda, ka ar šo metodi ir zems separācijas kvalitāte, savukārt citi pētnieki, gluži pretēji, no visām iespējamām metodēm dod priekšroku HSC nabassaites asiņu nodalīšanai, precīzi izmantojot 6% hidroksietilcraudu. Tas izceļ hemopoētisko šūnu sedimentācijas augstu efektivitāti, kas saskaņā ar dažiem datiem sasniedz 84% līdz 90%.

Atbalstītāji cita viedokļa šķiet, ka gandrīz visiem frakcionēšanas procesiem iesaistīt lielos zaudējumus yadrosoderzhashih šūnas un piedāvājam veikt nošķiršanu centrifugējot, atdalot nabassaites asinīm 3 frakcijās: eritrocīts leikocītu un plazmas gredzena. Atdala šūnas šajā veidā, izgudrotāji ir konstatēts, ka to saturs mononukleāro šūnu sākumā asinsrades cilmes šūnu un šūnu ar CD34 + immunophenotype beigās bija attiecīgi 90, 88 un 100% no sākotnējā līmeņa. Līdzīgi daudzumi attīrīta pieauguma šo metodi nabassaites asins šūnu, kas iegūta ar citu pētnieku: pēc sedimentācijas kodolainajās piešķirti 92%, 98% - monomolekulārs 96% - CD34 pozitīvu šūnu un 106% no kolonijas veidojošas vienības.

In the late '90s kā līdzekli nogulumu plaši izmanto želatīnu. Klīniskajā praksē, izmantojot želatīns asinsradi cilmes šūnas izolēti no nabassaites asinīm kopš 1994. Gada. Lietojot 3% šķīdumu želatīns atgūšanas efektivitātes kodolaino šūnas sasniedz 88-94%. Plaši izmantot želatīna veidojot nabassaites asins bankas ir apstiprinājusi savas priekšrocības salīdzinājumā ar citiem līdzekļiem nogulsnēm. Salīdzinošā analīze no visas iepriekš minētās metodes izolācijas kodolaino šūnu attiecībā uz to secīgai izmantošanai katrā no testa vadu asins paraugiem, kas parādīja, ka optimāli sedimenter-out mononukleāro šūnu ar fenotipu CD34 + / CD45 +, kā arī pēc skaita CFU-GM un CFU-GEMM ir 3% želatīna šķīdums. Tas izrādījās ievērojami mazāk efektīvas metodes, izmantojot Ficoll blīvuma gradientu, kā arī no metilcelulozes un hidroksietil cietes izmantošana, kurā hematopoētiskā šūnu zaudējums sasniedza 60%.

Nabas saites asiņu cilmes šūnu transplantācijas apjoma paplašināšanās ir saistīta ne tikai ar to ražošanas metožu attīstību, bet arī uzglabāšanu. Ir daudzas problēmas, kas tieši saistītas ar nabassaites asiņu sagatavošanu ilgstošai uzglabāšanai un optimālu kriofonēšanas tehnoloģiju izvēli tā paraugiem. Starp tiem ir jautājumi par to, vai ir lietderīgi veikt atdalīšanas procedūras, izmantot dažādus krioposavienojošus līdzekļus un izmantot metodes atkausētu šūnu sagatavošanai transplantācijai. Vietējo nabassaites asiņu paraugus bieži transportē no reģioniem, kas atrodas tālu no hematoloģiskajiem centriem. Saistībā ar to rodas problēma par pieļaujamajiem nabas asiņu uzglabāšanas periodiem no tā saņemšanas brīža līdz kriobes atjaunošanai, kas ir īpaši nozīmīga nabassaites asiņu banku attīstībā.

Par funkcionālo aktivitāti hematopoētiskām nabassaites asins šūnu pēc ilgstošas glabāšanas (līdz 12 gadiem), kas ir šķidrā slāpekļa pētījums atklāja, ka apmēram 95% no asinsrades šūnu šajā laikā nezaudē savu augsto proliferāciju jaudu. Papīra Yurasova S. Et al (1997) parādīja, ka nabassaites asinis, uzglabājot istabas temperatūrā (22 ° C), vai pie 4 ° C temperatūrā, kas ir 24 un 48 stundu laikā nav būtiski samazināt dzīvotspēju asinsrades øúnu ka sākotnējais līmenis ir attiecīgi 92 un 88%. Tomēr, ja glabāšanas laiks tiek pagarināts līdz trim dienām, dzīvildzīgu nukleušo šūnu skaits nabassaites asinīs ir ievērojami samazināts. Tajā pašā laikā citu pētījumu laikā tika konstatēts, ka, uzglabājot 2-3 dienas temperatūrā 22 vai 4 ° C, galvenokārt ietekmē nobriedušu granulocītu, nevis hematopoētisko šūnu dzīvotspēju.

Par dzīvotspēju nabassaites asiņu asinsrades cilmes šūnas var būt no sistēmas sastāvdaļu negatīvu ietekmi uz tās iekasēšanu. Analīze par ietekmi, dažādu antikoagulantus, kura darbība mehānisms ir saistīts ar saistīšanās ar kalcija joniem (ACD, EDTA, XAPD-1) asinsrades cilmes šūnu nabassaites asiņu uzglabāšanas nosacījumus 24 līdz 72 stundu laikā atklāja savu negatīvo ietekmi uz dzīvotspēju kodolaino šūnām. Šajā sakarā, autori iesaka izmantot PBS (fosfāta buferšķīdumu), pievienojot native heparīna bez konservanta, kura koncentrācija ir 20 U / ml, kas, pēc to domām, ļauj palielināt ilgumu uzglabāšanas nefrakcionētu nabas saites asiņu līdz 72 stundām un saglabā funkcionālo aktivitāti kolonijas veidojošas vienības. Tomēr pētījuma saglabāšanas CFU-GM un CFU-G pierādīts, ka nabassaites asiņu uzglabāšanas laiku pirms kriokonservācijas nedrīkst pārsniegt deviņas stundas. Protams, šajā gadījumā būtu jārīkojas arī princips, ka, ja ir pretrunīgi dati būtu jāizmanto minimālais ieteicams vads asins glabāšanas laiku un sākt programmējamā iesaldēšanas izolēti šūnas, cik ātri vien iespējams.

Ja sasalst nabassaites asiņu asinsrades cilmes šūnas, kā šķidruma aizsardzības līdzekli parasti izmanto 10% DMSO šķīdumu. Tomēr papildus izteiktajai krioaizsardzības iedarbībai dimetilsulfoksīdam šajā koncentrācijā ir tieša citotoksiska iedarbība pat pie nosacījuma, ka nabassaites asins asiņojošās šūnas ir minimāli pakļautas iedarbībai. Lai samazinātu DMSO citotoksisko iedarbību, ekspozīcijas temperatūra nullei, tiek palielināts visu manipulāciju ātrums un atkārtota mazgāšana pēc nabas saites paraugu atlaidināšanas.

Ukrainas Medicīnas akadēmijas Hematoloģijas un transfizioloģijas institūts kopš 1995. Gada ir attīstījis zinātnisko virzienu, kura mērķis ir pētīt nabassaites asiņu kā alternatīvu cilmes šūnu avotu. Jo īpaši ir izstrādātas jaunas tehnoloģijas nefrakcionētu un frakcionētu nabassaites asiņu transplantātu zemu temperatūras krikopesorēšanai. Kā krioprotektants tiek izmantots zemas molekulmasas medicīniskais polivinilpirolidons. Nefrakcionēto nabassaites asiņu krioprepresēšanas metode ir balstīta uz oriģinālu šūnu sagatavošanas tehnoloģiju un šūnu suspensijas īpašas apstrādes tehniku tieši pirms transplantācijas.

Viens no svarīgākajiem faktoriem, kas ietekmē krioaizsargāto hemopoētisko cilmes šūnu funkcionālo aktivitāti, ir šūnu suspensijas dzesēšanas ātrums, it īpaši kristalizācijas fāzē. Programmatūras pieeja, lai atrisinātu ātruma un sasalšanas laika problēmu, nodrošina lieliskas iespējas vienkāršām un ļoti efektīvām krioizsardzības metodēm, neveicot šūnas suspensijas mazināšanu no krioprotektoriem pirms transplantācijas.

Tūlītējas sasaldēšanas un atlaidināšanas stadijas visbīstamākās ir šūnu dzīvotspēja to sagatavošanas laikā. Iesimot hemopoētiskās šūnas, ievērojama daļa no tām var iznīcināt starpbloku barotnes pārejas brīdī no šķidruma līdz cietajai fāzei - kristalizācija. Lai samazinātu šūnu nāves īpatsvaru, tiek izmantoti krioprotektori, zinātniskās literatūras atbilstošie darbības mehānismi un krioaizsardzības efektivitāte.

Daudzsološs virziens optimizācijas paņēmieni kriokonservēšanai kaulu smadzenēs un nabassaites asins šūnas ir apvienot vienā risinājumu zemas koncentrācijas cryoprotectants ar vairākiem dažādiem darbības mehānismiem, piemēram, darbojoties uz DMSO intracelulārā līmeni un hidroksiletil cietes vai albumīns, kam ārpusšūnu Ietverošā efektu.

Par uzglabāšana zemā temperatūrā no nabassaites asins šūnu tradicionāli tiek izmantoti 20% DMSO risinājumu, kas ir pastāvīgi mehāniski maisot ledus vannā, tika lēnām ielej šūnu suspensijas, lai panāktu vienādas (1: 1), apjoms attiecība šūnu suspensijas un krioprotektanta. Dimetilsulfoksīda galīgā koncentrācija ir 10%. Šūnu suspenziju atdzesēts par programmu pie ātruma krioustanovke HS / min līdz -40 ° C, pēc tam, kad dzesēšanas ātrums tika palielināta līdz 10 ° C / min. Pēc tam, kad sasniedzot -100 ° C līdz šūnu suspensijas tvertnes, kas novietota šķidrajā slāpeklī (-196 ° C). Ar šo procedūru drošības sasaldēšana funkcionāli aktīvas mononukleāro šūnu pēc atkausēšanas sasniedz 85% no sākotnējā līmeņa.

Cryopreservation metožu pārveidošana ir vērsta uz DMSO koncentrācijas samazināšanu, pievienojot hidroksietilkravu (attiecīgi 5 un 6% ir dimetilsulfoksīda un hidroksietila cietes galīgās koncentrācijas). Šī krioaizsargātāja kombinācija ir augsta efektivitāte, kad mieloīda šūnu suspensija ir sasalusi, ar citoprotekciju ne mazāk, kā ar vienu 10% dimetilsulfoksīda šķīdumu. Dzīvotspējīgo nukleozīnu skaits sasniedza 96,7% no sākotnējā līmeņa, un to funkcionālā aktivitāte, ko aprēķināja pēc CFU-GM skaita, bija 81,8%.

Lietojot dimetilsulfoksīda šķīdumu koncentrācijā robežās no 5 līdz 10% kombinācijā ar 4% hidroksietil cietes (galīgo koncentrāciju), konstatēja, ka saglabāšana CD34 pozitīvu šūnu šiem diapazoniem Dimetilsulfoksīdu praktiski nemainīgs. Tajā pašā laikā apstākļos, samazinot koncentrāciju DMSO no 5 līdz 2,5%, tiek novērota masveida bojāeju nabassaites asins šūnu skaits - dzīvotspējīgo šūnu vienību tiek samazināta no 85,4 līdz 12,2%. Citi autori arī secināja, ka tas bija 5 un 10% šķīdumu dimetilsulfoksīdu (jo autortiesību iemiesojumā - kombinācijā ar autologo serums) ar maksimālu efektivitāti nodrošina cytoprotection kriokonservēšanai nabassaites asins HSC laikā. Bez tam, augsts drošības secīgi sasaldētas un atkausēt šūna ir iezīmēta kombinācijas gadījumā uz 5 vai 10% DMSO 4% hidroksietil cietes šķīdumu, īpaši pie kontrolētā dzesēšanas ātrumu TOS / min. Citā izmantojamā papīra krioaizsargājošu šķīduma, kas sastāv no trim sastāvdaļām jau - DMSO, attīrītu cilvēka seruma albumīnu, un RPMI vidē proporcijā 1: 4: 5, kas pievienota pie šūnu suspensijas līdz tāda paša tilpuma attiecību (final DMSO koncentrācija bija 5%). Pēc atkausēšanas ūdens vannā temperatūrā + 4 ° C CFU-GM drošība pārsniedza 94%.

Daži autori iesaka izmantot nefrakcionētu nabassaites asiņu, lai saglabātu krioiskus dzīvniekus, jo sarkano asins šūnu noņemšanas laikā tiek zaudēti ievērojami hematopoētisko šūnu daudzumi. Šajā iemiesojumā 10% dimetilsulfoksīda šķīdumu izmanto, lai aizsargātu mononukleāros šūnas no kriokristalizācijas postošajām sekām. Sasaldēšanu veic ar pastāvīgu dzesēšanas ātrumu HS / min līdz -80 ° C, pēc tam nabas saites asins šūnu suspensija tiek iegremdēta šķidrā slāpekļa veidā. Ar šo sasalšanas metodi notiek eritrocītu daļēja liza, tādēļ asins paraugi neprasa frakcionēšanu. Pēc atkausēšanas šūnu suspensiju nomazgā no brīvā hemoglobīna un dimetilsulfoksīda cilvēka albumīna šķīdumā vai pacienta autologā serumā, un to izmanto transplantācijai.

Saglabāšana asinsrades cilmes šūnu pēc atkausēšanas nefrakcionētu nabassaites asinis patiešām augstāks nekā frakcionētam, bet sakarā ar krioustoychivostyu sarkano asins šūnu, var radīt nopietnas problēmas, kā rezultātā pēc asins pārliešanas pārlejot ABO-saderīga eritrocītu. Turklāt jūtami uzglabā Nefrakcionēts asins apjoma pieaugumu. No klīniskā viedokļa, tomēr vēl labāk sasaldēšana iepriekš izdala un attīra no citiem šūnu frakcijās nabassaites asiņu asinsrades šūnām.

It īpaši, metode ir kriokonservēšanai vads asins šūnu frakcionētam ļauj noņemt eritrocītus sagatavošanā sasaldēšanai, kas izmanto 6% šķīdumu hidroksietil cietes kompozīcija plazmozameshchath šķīduma "Stabizol". Pēc atkausēšanas iegūtā šūnu suspensija ir gatava klīniskai lietošanai bez papildu manipulācijām.

Tādējādi pašlaik ir ļoti daudz efektīvu nabassaites asiņu krioprezervēšanas veidu. Galvenā atšķirība ir tāda, ka asins paraugi tiek sasaldēti nefrakcionēti vai preparāta sagatavošanas posmā tiek sadalīti šūnu frakcijās, un novāktās nukleušās šūnas bez eritrocītu sajaukuma.

Nabassaites asiņu smadzeņu šūnu transplantācija

In the late 80 - 90. Gadu sākumā no pagājušā gadsimta, tika konstatēts, ka nabassaites asinis, nodrošinot būtisku darbību auglim grūtniecības laikā, ir bagāta ar asinsrades cilmes šūnas. Nabas saites asiņu šūnu iegūšanas relatīvā vienkāršība un acīmredzamu ētisku problēmu trūkums veicināja nabassaites asiņu cilmes šūnu izmantošanu praktiskajās medicīnās. Pirmā veiksmīgā nabassaites asiņu pārstādīšana bērnam ar Fanconi anēmiju kalpoja kā sākumpunkts, lai paplašinātu nabassaites asiņu cilmes šūnu transplantācijas apjomus un izveidotu sistēmu tās banku nodrošināšanai. Vispasaules nabassaites asiņu banku sistēmā lielākais ir Placental Blood centrs Ņujorkā, kas atrodas Nacionālo veselības institūtu bilancē. Uzglabāto nabassaites asiņu paraugu skaits šajā bankā tuvojas 20 SIA. Palielinās arī saņēmēju skaits (galvenokārt bērni), un veiksmīga transplantācija ir veikta. Saskaņā ar ASV Veselības departamenta datiem HSC nabassaites asiņu saņēmēju pēcdzemdību perioda atkārtotas lietošanas periods jau ir pārsniedzis 10 gadus.

Tas nav pārsteidzoši, jo daudzi pētījumi asinsrades potenciālu nabassaites asiņu ir pierādījuši, ka kvantitāte un kvalitāte ātrāk cilmes šūnas, ne tikai neatpaliek no pieaugušo cilvēku kaulu smadzenēs, bet arī daži pasākumi pārsniedz to. Augstāka proliferatīvās potenciāls nabassaites asiņu cilmes šūnu izraisīja attīstības šūnu signalizācijas funkcijas, klātbūtne receptoriem HSCs konkrētām augšanas faktoriem, jauda nabassaites asins šūnu autokrīns ražošanu augšanas faktoru, liela izmēra un garuma telomeres.

Tādējādi, genomikas un fenotipa pazīmes asinsrades cilmes šūnu nabassaites asiņu jau iepriekš kvalitāte iemājot augstu potenciālu donora asinsrades atveseļošanās saņēmējam.

Nabassaites asiņu transplantācijas priekšrocības

Starp reālu labumu, izmantojot asinsrades nabassaites asiņu cilmes šūnu transplantācija pār citiem avotiem asinsrades šūnu jāatzīmē, gandrīz nulles risku veselībai donora (ja tas nav uzskatāms par šāda placentu), vienlaikus novēršot nepieciešamību vispārējo anestēziju. No nabas saites asins šūnu transplantācija lietošana paplašina saistīts daļēji ar HLA-saderīgu transplantāta sistēmas (nesaderības no viena līdz trim antigēnu). Tehnika ilgtermiņa glabāšanai hematopoētiskām nabassaites asins šūnu sasaldētā stāvoklī, kas palielina varbūtību iegūt retu HLA-tipa un samazina meklēšanas laiku HLA atbilstības alogēnas transplantācijas. Tajā pašā laikā ievērojami samazinās risks, ka daži latentas infekcijas, ko pārraida transmisijas ceļš, attīstīsies. Turklāt pastāv lēta bioloģiskās dzīvības apdrošināšanas forma, kas saistīta ar iespēju lietot nabassaites asins šūnas autologai transplantācijai.

Tomēr, tā kā nelielu daudzumu asinīs, kas var tikt savākti no placentas (vidēji ne vairāk kā 100 ml) uz priekšu, problēma iegūt maksimāli iespējamo apjomu, asiņu no nabassaites vēnā stingrā saskaņā ar nosacījumiem par minimālo riska bakteriālais piesārņojums nabassaites asins iegūti paraugiem.

Primitīvās hematopoētiskās šūnas no nabas saites asins parasti tiek identificētas ar to, ka uz to virsmas glikofosfoproteina CD34, un pamatojoties uz to funkcionālo īpašību, pārbaudot clonogenic assay vai koloniju veidošanos in vitro. Salīdzinošā analīze parādīja, ka nabas saites asiņu un kaulu smadzeņu maksimālo saturu CD34 pozitīvu mononukleāriem frakcijā ir attiecīgi 1,6 un 5,0%, maksimālais līmenis kolonijas veidojošo vienību ar apakšgrupā CD34 + šūnas - 80 un 25%, kopējā klonēšanas efektivitāti CD34 + -cells - 88 un 58%, maksimālais koloniju veidojošās šūnas ar augstu proliferatīvā potenciālu (HPP-CFC in -populyatsii CD34 +) - 50 un 6.5%. Jāpiebilst, ka klonēšanas efektivitāte CD34 + CD38-šūnu un spēju reaģēt uz citokīnu stimulāciju arī augstāks asinsrades cilmes šūnu nabassaites asinīs.

Kombinētās fenotipa antigēni Thy-1, CD34 un CD45RA apliecina augstu proliferatīva jaudu saites asins asinsrades šūnām, un ekspresiju trīs antigēnu virsmas nabas saites asiņu šūnu norāda, ka tie pieder pie cilmes šūnu. Turklāt ir konstatēts, ka nabassaites asinis satur šūnas ar CD34 + fenotipu, kuriem nav lineāro diferenciācijas marķieru. Līmenis smadzeņu asins šūnu subpopulāciju ar fenotipā profilam CD34 + / Lin ir aptuveni 1% no kopējā skaita CD34 pozitīvu šūnu. Asinsrades cilmes šūnas par pamatu, lai nabassaites asinis kā ar limfoīdo šūnu līnijās, un vairākas lineārās polipotentas mieloīdo šūnu diferenciācijas, kas arī norāda, ka tie pieder pie cilmes šūnām.

Kā jau minēts, ka būtiskas atšķirības starp kaulu smadzenēs un nabassaites asiņu ir summas, ko iegūst ar vienu paraugu ņemšanas procedūru, ko izmanto, lai transplantācijas asinsrades šūnām. Kad kaulu smadzeņu transplantācija zudums šūnu masas sadalīšanas procesā, kriokonservācijas, atsaldēšanas un testēšana ir pieļaujama robežās no 40-50%, vads asins šūnas, piemēram zaudējums ir ļoti būtiska, jo, lietojot nepietiekams skaits HSC transplantācijas var būt pārliecinošs. Saskaņā ar G. KOGLER et al (1998), par šūnu transplantācijas saņēmējs ķermeņa svaru 10 kg potenciāla transplantācija (kopējais skaits savākto nabassaites asiņu paraugos - 2098), var būt visi vads asins paraugus, ķermeņa svars 35 kg - 67%, un tikai tad, 25% paraugu varēs nodrošināt efektīvu transplantāciju pacientiem ar ķermeņa svaru 50-70 kg. Šī klīniskā situācija norāda uz nepieciešamību optimizēt un uzlabot esošās nabas saites asiņu šūnu paraugu ņemšanas, reprodukcijas un uzglabāšanas metodes efektivitāti. Tādēļ jautājumi standartizācija paraugu ņemšanas metožu, testēšanu, atdalīšanas un kriokonservācijas nabassaites asiņu tagad ir plaši apspriests literatūrā izveidei asins banku, tās izmantošanu klīnikā, kā arī nosaka nosacījumus un noteikumus glabāšanai asinsrades cilmes šūnu nabassaites asinīs.

[7], [8], [9],

Nabassaites asiņu asinsrades cilmes šūnu izmantošana medicīnā

Parasti līdz pat 10 ⁶ hematopoētiskajām cilmes šūnām var izolēt no nabassaites asinīm , retāk - vairāk. Saistībā ar to, līdz šim brīdim paliek jautājums par tik daudzām hematopoētisko nabassaites asins šūnu pietiekamību, lai atjaunotu pieaugušā saņēmēja hematopoēzi. Atzinumi par šo jautājumu tika sadalīti. Daži pētnieki uzskata, ka šī summa ir pietiekama, lai transplantācijas bērniem, bet pārāk maza, lai transplantācijas pieaugušo cilvēku, par kuru administrācija ir optimālais (7-10) × 10 ⁶ CD34 pozitīvu šūnu skaitu uz 1 kg ķermeņa svara - vidēji 7 × 10 ⁸ par vienu transplantātu. No šiem aprēķiniem izriet, ka viens nabassaites paraugs satur 700 reizes mazāku hematopoētisko cilmes šūnu, nekā tas nepieciešams vienai transplantācijai pieaugušam pacientam. Tomēr šāds kvantitatīvais novērtējums tiek veikts pēc analoģijas ar transfūziju šūnu skaitu kaulu smadzenēs un pilnībā ignorē hematopoēzes ontogēnās pazīmes.

Jo īpaši, tā ignorē faktu, augstāku proliferāciju kapacitāti asinsrades cilmes šūnu nabassaites asiņu, salīdzinot ar asinsrades cilmes šūnām kaulu smadzenēs. Ar in vitro rezultātiem koloniju veidošanās potenciālu liecina, ka viena deva var nodrošināt nabassaites asiņu asinsrades atjaunotos pieaugušo saņēmējam. No otras puses, mums nevajadzētu aizmirst, ka skaits HSCs samazinās pat procesā embrionālo attīstību: saturu CD34 pozitīvu šūnu nabassaites asiņu ir lineāri samazinās 5 reizes laikā 20 nedēļas (asinis pētīšanai tika iegūts gadījumā priekšlaicīgas pārtraukšanas grūtniecības laikā) līdz 40 grūtniecības nedēļās (fizioloģisko dzemdību periods), kuram pievienots paralēls, pastāvīgs pieaugums lineāru citodiferenciācijas marķieru izteiksmē.

Sakarā ar to trūkst standartizētas pieejas kvantitatīvās nabassaites asins paraugos cilmšūnām strīdi optimālā deva asinsrades cilmes šūnu Nabas asins turpinās. Daži pētnieki uzskata, ka tā kā kritēriju atlase nabassaites asins paraugu var izmantot skaitu kodolaino šūnu un mononukleāro šūnu, pārrēķināt uz saņēmēja ķermeņa masas, tas ir, to devu. Daži autori uzskata, ka minimālā kvantitatīva slieksnis CD34 + šūnu pat autotransplantation GCW ir 2 × 10 ⁶ / kg. In devas asinsrades øúnu palielināšana līdz 5 x 10 ⁶ šūnas / kg (kopā 2,5), kas jau nodrošina vairāk piemērots pēctransplantācijas periodā, samazina saslimstību infekcijas komplikāciju un saīsina periodu profilaktiska antibiotiku terapiju.

Pēc E. Gluckman et al (1998) in Hematology veiksmīgas transplantācijas nabas saites asins šūnu tas ir ievads no vismaz 3,7 x 10 ⁷ kodolaino šūnas uz 1 kg ķermeņa svara saņēmējam. Samazinot devu asinsrades cilmes šūnu 1 × 10 ⁷ vai mazāk kodolaino šūnām uz 1 kg ķermeņa svara pacienta un risku transplantāts neveiksmju atkārtotas vēži asinīs pieaug dramatiski. Jāatzīst, ka vismaz cilmes šūnu skaits, kas nepieciešams, lai ātri un asinsradi atgūšanu pēc allotransplantation GSK, vēl nav zināms. Teorētiski to var panākt, izmantojot vienu šūnu, bet klīniskā kaulu smadzeņu pārstādīšanas strauju un stabilu iemājošanai garantēta pārliešanai vismaz (1-3) x 10 ⁸ kodoli šūnas uz 1 kg pacienta ķermeņa masu.

Nesen veiktais detalizētais pētījums, lai noteiktu optimālo HSC daudzumu onkohematoloģijā, ietvēra pacientu novērošanu trīs grupās, kas izdalītas atkarībā no CD34 pozitīvo šūnu satura transplantāta materiālā. Pacienti no pirmās grupas saņēma (3-5) x 10 ⁶ šūnas / kg. HSC deva otras grupas pacientiem bija (5-10) x 10 ⁶ šūnas / kg, bet trešās grupas pacienti saņēma transplantāciju vairāk nekā 10 x 10 ⁶ CD34 + šūnām / kg. Vislabākie rezultāti tika novēroti saņēmēju grupā, kas saņēma transplantātu ar CD34 pozitīvo šūnu skaitu (3-5) x 10 ⁶ / kg. Ja transplantēto šūnu deva palielinājās virs 5 × 10 ⁶ / kg, statistiski nozīmīgi ieguvumi nebija noteikti. Tādējādi ļoti lielas saturs HSCs in transplantācijas (> 10 x x 10 ⁶ / kg), bija saistīts ar ievērojamu daudzumu atlikušais reinfusion audzēja šūnu, kas noved pie recidīva slimības. Nav tiešas saistības starp transplantēto alogēno progenitoru šūnu skaitu un "transplantāta pret saimnieka" reakciju attīstību.

HSC asinsrites asiņu transplantācijas pieredze, kas uzkrāta pasaulē, apliecina augstu repopulācijas potenciālu. Nabassaites asiņu transplantācijas pagatavošanas ātrums korelē ar ievadīto nucleated šūnu skaitu. Labākos rezultātus novēro, ja transplantācija ir 3 × 10 ⁷ / kg, bet kaulu smadzenēm šī deva ir 2 × 10 ⁸ / kg. Saskaņā ar koordinācijas centru datiem, 2000. Gada beigās pasaulē tika veiktas 1200 nabas saites asiņu šūnu transplantācijas, galvenokārt no donoru radiniekiem (83%). Acīmredzot nabassaites asinis jāuzskata par alternatīvu kaulu smadzenēm transplantācijai pacientiem ar hemoblastozi.

Tomēr jaundzimušo raksturs Cordova avots asinsrades audu mudinot dēļ klātbūtni funkcionālajām īpašībām tā GCW. Tomēr tikai klīniskā pieredze var sniegt atbildi uz jautājumu par pietiekamību paraugu nabassaites asiņu pieaugušo asinsrades izšķīdināšanu saņēmēja ar aplāzijas asinsradi. Transplantācija no nabas saites asiņu šūnu lieto ārstēšanā daudzu slimību audzēja un ne-audzēju dabas: leikēmijas un mielodisplastisko sindromu, ne-Hodžkina limfomu, un neiroblastomas, aplastiskās anēmijas, iedzimtu Fankoni anēmiju un Diamond Black ventilators, deficītu, piemēram, leikocītu adhēzijas, Barr sindroma, Gunther slimība Harlera sindroms, talasēmijas .

Cieša uzmanība un atsevišķa izpēte ir pelnījuši nabassaites asiņu asinsrades šūnu transplantācijas imunoloģiskos aspektus. Ir pierādīts, ka gadījumā, ja transplantācija nabassaites asiņu cilmes šūnu donoru ar nepilnīgiem HLA atbilstības transplantācijas rezultāti ir diezgan apmierinošs, ka, saskaņā ar autoru, norādot zemāku immunoreactivity nabassaites asiņu nekā kaulu smadzenēm.

Detalizēts pētījums par šūnu sastāvu nabassaites asiņu uzrādīja iezīmes gan fenotipa spektra efektoru šūnu imūnās sistēmas un to funkcionālo aktivitāti, kas ļauj uzskatīt nabassaites asinis kā avotu HSCs ar salīdzinoši zemu risku reakciju "transplantāta atgrūšanas". Papildu funkcijas Funkcionālā brieduma imūndeficīta nabassaites asins šūnu Jāatzīmē nelīdzsvarotību citokīnu veidošanās un samazinājums jutību pret citokīni jaunu regulējumu par imūnās atbildes reakcijas. Iegūtais citotoksisko limfocītu aktivitātes inhibīciju uzskata par faktoru, kas veicina imunoloģiskās tolerances veidošanos pret transplantēto hemopoētisko audu. Populācijā nabassaites asiņu limfocītos, nevis perifērās asinīs un kaulu smadzenēs no pieaugušo donoriem, dominē neaktīvas, nenobriedušas šūnas un supresorgēnā šūnas. Tas norāda uz samazinātu T-limfocītu nabassaites asiņu pieejamību imūnās atbildes reakcijai. Nabas saites asiņu šūnu monocītu populācijas būtiska iezīme ir funkcionāli pilnīgu un aktīvo antigēnu pārstāvošo šūnu zemais saturs.

No vienas puses, zema gatavības pakāpe efektoru šūnu imūnās sistēmas nabassaites asinīs rādījumus attiecas uz tā izmantošanu klīnikā, jo šie līdzekļi ļauj samazināt intensitātes imūnās konflikts starp donorvalstīm un saņēmējvalstīm šūnām. Bet, no otras puses, mēs zinām, ka pastāv korelācija starp pakāpi reakcijas "transplantāts pret saimnieku" un transplantācijas pretaudzēju iedarbību, ti, ietekmi uz attīstību "transplantāts pret-leikēmijas". Saistībā ar šo studiju pretaudzēju citotoksicitātes nabassaites asins šūnu tika veikta. Rezultāti liecina, ka, neskatoties uz ļoti novājinātu imūno reakciju nabassaites asins šūnu uz antigēnu stimulāciju, aktivizēto pirmajā vietā ir dabas killer šūnas un killeropodobnymi šūnas, kas ir aktīvi iesaistītas mehānismiem īstenošanas pretvēža citotoksicitāti. Turklāt, nabas saites asiņu limfocītu subpopulāciju, tika konstatēts, ar fenotipu CD16 + CD56 + un CD16 "TCRa / p +. Tiek uzskatīts, ka šīs šūnas tiek aktivēto veidā īstenot reakcija" transplantāts-pret-leikēmijas ".

Pēc institūta Onkoloģijas, Medicīnas zinātņu akadēmijas Ukrainas cryopreserved asinsrades šūnas no nabassaites asinīm tika ievadītas vēža pacientiem ar pastāvīgu hipoplāziju asinsradi dēļ ķīmijterapiju un staru terapiju. Šiem pacientiem, transplantācija asinsrades cilmes šūnu nabassaites asiņu efektīvi atjaunot asins apspiešanu, par ko liecina pastāvīgu augstumā nobriedušu veido elementu perifērajās asinīs, kā arī in rādītāju pieaugumu raksturo stāvokli šūnu un humorālo imunitāti. Stabilitāte repopulyatsionnogo efektu pēc transplantācijas hematopoētiskām nabassaites asins šūnu ļauj turpināt radiācijas un ķīmijterapijas, nepārtraucot ārstēšanu. Ir pierādījumi par lielāku efektivitāti allotransplantāta cilmes šūnu nabassaites asins vēža slimniekiem: ikgadējais atkārtošanās risks tumora to lietošanas bija 25% salīdzinājumā ar 40% pacientiem ar transplantētu alogēno kaulu smadzeņu gēnu.

Par darbības cryopreserved nabassaites asiņu cilmes šūnu mehānisms būtu jāuzskata par rezultātā humorālās stimulāciju, ko izraisa ar unikālu spēju jaundzimušo šūnu autokrīns ražošanu asinsrades augšanas faktoriem, kā arī rezultātā pagaidu iemājot donoru šūnas (kā apstiprinājums asinsradi saņēmējiem - ievērojams pieaugums satura perifēro asins augļa hemoglobīna saņēmējam 7-15 th dienā pēc transfūzijas, salīdzinot ar sākotnējo stāvokli). Nav saņēmējiem nabassaites asiņu pēc transfūzijas reakcijas - rezultāts no tā relatīvo tolerances imūnās šūnas, kā arī ticamības kritēriju lietderību cryopreserved bioloģiskā materiāla.

Cilmes šūnas T limfocītu killer saites asins spēj aktivācijas reibumā eksogēno citokīnu stimulācija, kas tiek izmantota, lai izstrādātu jaunus ex vivo un in vivo metodes inducēt pretvēža citotoksiska limfoīdas šūnas, lai pēc tam transplantāta imūnterapiju. Bez tam, "nobriedis" no genomā nabas asins imūnās šūnas ļauj to izmantot, lai uzlabotu pretaudzēju aktivitāte ar molekulāro modelēšanu.

Šodien nabassaites asinis ir plaši pielietotas pediatrajā hematoloģijā. Bērniem ar akūtu leikēmiju allotransplantation par asinsrades cilmes šūnu nabassaites asiņu, salīdzinot ar kaulu smadzeņu allotransplantācijas, ievērojami samazina saslimstību ar reakciju "transplantāts pret uzņēmēja". Tomēr jāpiezīmē ilgā periodā neitropēniju un trombocitopēniju, un diemžēl, augstāks līmenis, 100 dienas mirstības pēc transplantācijas. Nepieciešams ilgāku laiku atveseļošanās perifēro asiņu granulocītu un trombocītu varētu būt saistīts ar nepietiekamās diferenciācijas atsevišķu subpopulāciju CD34 pozitīvu šūnu, nabas saites asins kā liecina zemo absorbcijas radioaktīvo Rhodamine un zemu izpausmi CD38 antigēnu uz to virsmas.

Tajā pašā laikā, transplantācija asinsrades cilmes šūnu nabas asins pieaugušiem pacientiem, kas veikti, jo trūkst gan saderīgā nesaistītu kaulu smadzeņu donors, kā arī iespējas mobilizēt autologo HSC parādīja augstu ikgadējo recidīvu dzīvildze pacientiem vecumā līdz 30 gadiem (73%) . Paplašināšana saņēmējs vecuma diapazons (18-46 gadi) samazinājās izdzīvošanu līdz 53%.

Kvantitatīvā analīze no šūnām ar fenotipa CD34 + kaulu smadzeņu un saites asins parādīja augstāku (3,5 reizes) to saturu kaulu smadzenēs, bet nabas saites asins parādīja ievērojamu pārsvaru šūnu ar fenotipa profilam CD34 + HLA-DR .Izvestno, chtokletkikrovisimmunologicheskimi marķieru CD34 + HLA-DR vairoties vairāk aktīvs nekā šūnām ar immunophenotype CD34 + HLA-DR +, kā apstiprināts eksperimentāliem pētījumiem par pieauguma ilgtermiņa kultūru asinsrades šūnās in vitro. Primitīvās šūnu progenitors ar fenotipa CD34 + CD38 ietverts nabas saites asins un kaulu smadzenēs, bet nabas saites asins šūnu ar marķieri, kas CD34 + CD38 ir augstāka clonogenic aktivitāte nekā asinsrades šūnām un tā paša fenotipu, kas izdalīti no pieaugušo donors kaulu smadzenēs. Turklāt, nabas saites asins šūnu, ar CD34 + CD38 immunophenotype būs vairoties, atbildot uz stimulācijas ar citokīnu (IL-3, IL-6, G-CSF), un reproducēt 7 reizes vairāk kolonijas ilgtermiņa kultūrām kā kaulu smadzeņu šūnām.

Nabas asins cilmes šūnu bankas

Par pareizu attīstību jaunā jomā praktiskās medicīnas - transplantācijas nabassaites asiņu cilmes šūnām, kā arī, lai veiktu transplantāciju no hematopoētiskām kaulu smadzeņu cilmes šūnas, jums ir plašs tīkls asins bankām, kas jau ir reģistrētas ASV un Eiropā. Nabassaites asiņu banku iekšējos tīklus apvieno Netcord Bankas asociācija. Par starptautisku asociāciju nabassaites asiņu bankām nosaka iespējamība nosaka fakts, ka, lai veiktu nesaistītus transplantācijas nepieciešams liels skaits paraugu Nabassaites asiņu drukāti, ļaujot izvēlēties HLA-identiski donoru. Tikai tādu banku sistēmas izveidošana, kurās tiek uzglabāti dažādu HLA tipu asiņu paraugi, patiešām var atrisināt nepieciešamā līdzekļu devēju. Lai izveidotu šādu nabassaites asiņu banku sistēmu, ir nepieciešams provizoriski izstrādāt ētiskas un tiesiskas normas, kuras pašlaik tiek apspriestas starptautiskā līmenī.

Lai izveidotu nabassaites asiņu bankas Ukrainā, ir jāizstrādā vairāki noteikumi un dokumenti.

Pirmkārt, šie jautājumi ir standartizēt nabassaites asiņu paraugu ņemšanas, frakcionēšanas un sasalšanas metodes. Tas ir nepieciešams, lai regulētu nabassaites asins ņemšanas noteikumus slimnīcās, saskaņā ar medicīnas ētikas prasībām, lai noteiktu minimālo summu, nabassaites asiņu, kas nodrošina veiksmīgu transplantācija. Ir jāsalīdzina un standartizācija dažādu kritēriju kvalitātes novērtēšanas un skaita asinsrades cilmes šūnu, kā arī HLA-tipa noteikšanas metodes un diagnostikas metodēm, ģenētisko un infekcijas slimībām, kas var pārraidīt infūzijas nabassaites asins šūnu noteikt vispārīgos atlases kritērijus veseliem donoriem. Ir vērts apspriest arī atsevišķu uzglabāšanas iespēju izveidošanu serumam, šūnām un DNS, kas iegūta no nabassaites asinīm.

Ir absolūti nepieciešams sakārtot datoru tīklu ar datiem par nabassaites asinīm, lai īstenotu attiecības ar kaulu smadzeņu donoru reģistriem. Tālākai attīstībai šūnu transplantācijas nepieciešams izstrādāt īpašus protokolus salīdzināšana par nabassaites asiņu transplantācijas un kaulu smadzenēs rezultātus no HLA-identiskiem radiniekiem, kā arī nesaistītiem donoriem. Kas nodarbojas ar ētikas un juridiskajām problēmām nabassaites asins šūnu klīnisko lietošanu var palīdzēt standartizēt dokumentāciju, tostarp informētas vecāku piekrišanu, kā arī paziņojumu par māti vai radiniekiem bērna identificēts ar ģenētisko un / vai infekcijas slimībām.

Noteicošais nosacījums attīstībai šūnu transplantācijas Ukrainā būs pieņemšana Nacionālās programmas ziedojuma cilmes šūnu un starptautiskās sadarbības attīstību ar citām valstīm, izmantojot Pasaules asociācijas donora kaulu smadzenēm (WMDA), Valsts ASV donora kaulu smadzeņu programmas (NMDP) un citiem reģistriem.

Vispārinot joprojām īsa vēsture asinsrades cilmes šūnu transplantācijas no nabassaites asiņu, mēs atzīmējam, ka pirmais pieņēmums par iespēju par nabassaites asiņu klīniskās pieteikumu, veikti sākumā 70, tika apstiprināti 80 gadu laikā no eksperimentāliem pētījumiem dzīvniekiem rezultātus, un 1988. Gadā gadā tika veikta pasaulē pirmo transplantācija asinsrades šūnas cilvēka nabassaites asiņu, un tad sāka izstrādāt globālu tīklu, nabassaites asins bankām. Pēc 10 gadiem, pacientu skaits ar transplantētu asinsrades šūnu, nabas saites asins tuvāk 800. Starp tām bija pacienti ar dažādām audzēju slimībām (leikēmijas, limfomas, solīdiem audzējiem) un ne-audzēju (iedzimtu imūndeficīta gadījumos, anēmija, slimībām, kas saistītas ar vielmaiņas traucējumiem) raksturs.

Nabassaites asinīs agrīnu un saistītu šūnu priekšteču saturs ir augstāks nekā pieaugušā perifēro asinīs. Līdz ar granulocītu-makrofāgu koloniju veidojošo vienību skaitu un to proliferatīvs potenciālu nabassaites asiņu ir daudz lielāks nekā perifēro asins pieaugušo, pat pēc ievadīšanas augšanas faktoru. Ilgākā laika posmā, in vitro šūnu kultūras, kas apzīmēti ar lielu proliferatīvo aktivitāti un dzīvotspēju vads asins šūnu nekā kaula smadzeņu šūnām. Kritiskie brīži transplantācija nabassaites asiņu cilmes šūnas ir asinsrades potenciālie numurs ar kodoliem šūnas, klātbūtne citomegalovīrusa infekcija, HLA saderīgu donora un saņēmēja, ķermeņa svara un vecuma pacientam.

Tomēr transplantācija nabassaites asiņu cilmes šūnu jāuzskata par alternatīvu kaulu smadzeņu transplantāciju, lai ārstētu smagu asins slimību, it īpaši bērniem. Klīniskās problēmas transplantācijas nabassaites asins šūnu pakāpeniski atrisināta - ir jau diezgan efektīvas paraugu ņemšanas paņēmieni, atdalīšana un uzglabāšana zemā temperatūrā nabassaites asins šūnu, ja nosacījumus veidošanās nabassaites asins bankām, testēšanas metodes uzlabojās kodoli šūnas. Optimal atdalīšana liela mēroga sagatavju saites asins asinsrades cilmes šūnas izveidošanu banku laikā būtu uzskatāms par 3% šķīduma želatīna un 6% hidroksietil cietes šķīduma.

Perehrestenko P. Et al (2001) pamatoti norāda, ka transplantācija no nabassaites asiņu cilmes šūnām vajadzētu ieņemt tai pienācīgo vietu kompleksajos terapeitisko pasākumu, lai pārvarētu depresiju asinsradi dažādu izcelsmi, jo GSK nabassaites asiņu atšķiras ar vairākām būtiskām priekšrocībām, no kuriem svarīgākais ir samērā viegli pēc ražas novākšanas, nepastāv risks donoram, zemu piesārņojuma jaundzimušo šūnu ar vīrusiem un salīdzinoši zemām izmaksām transplantācijas. Daži autori norāda, ka transplantācija nabassaites asins šūnu retāk kā kaulu smadzeņu šūnās ir pievienots komplikācijas, kas saistītas ar reakciju "transplantāts pret saimnieku", kas ir saistīts, viņuprāt, vāja izteiksme auklai asins šūnām HLA-DR antigēnu un to brieduma trūkums. Tomēr galvenais populācija kodolaino šūnu nabassaites asiņu ir T-limfocīti (SDz-pozitīvi šūnas), kuru saturs ir aptuveni 50%, kas ir par 20% mazāk nekā perifērās asinīs pieaugušo, bet arī fenotipa atšķirības apakšgrupu T-šūnu no šiem avoti ir niecīgs.

Starp faktoriem, kas tieši ietekmē izdzīvošanu cilmes šūnu transplantācijas no nabassaites asiņu, mums jāņem vērā vecumu pacientu (vislabākie rezultāti ir redzējis saņēmējiem vecumā līdz 5 gadiem), agrīni diagnosticēt slimības un formu leikēmijas (efektivitāte ir ievērojami augstāks akūta leikoze). Liela nozīme ir nātru nabassaites asiņu šūnu devai, kā arī to HLA saderībai ar saņēmēju. Tā nav nejaušība, analīze klīniskās efektivitātes nabassaites asiņu transplantācijas GSK onkoloģijā un Hematoloģijas parāda labākos rezultātus ārstēšanas izmantojot saistītus transplantācija: vienu gadu dzīvildze šajā gadījumā slimības brīvu sasniedz 63%, savukārt nesaistītu transplantācijas - tikai 29%.

Tādējādi klātbūtni lielu skaitu cilmes šūnu nabassaites asinīm un augstas repopulyatsionnaya spēju jaundzimušo asinsrades cilmes šūnas, lai tās piemērotu alogēnas transplantācijas pacientiem ar ļaundabīgas hematoloģiskas slimības. Tomēr ņemiet vērā, ka kopsavilkums asinsradi pēc transplantācijas asinsrades cilmes šūnu nabassaites asinis "ir izstiepts laikā": atjaunot saturs perifērisko asiņu neitrofīlu parasti notiek beigās 6. Nedēļas, un trombocitopēnija parādība izzūd, parasti pēc 6 mēnešiem. Turklāt, Nenobriedušā asinsrades šūnām, nabas saites asins neizslēdz imunoloģisku konfliktu: stipras gaitu akūtu un hronisku reakcijas "transplantāts pret saimnieku", ko novēro attiecīgi 23 un 25% no saņēmēju. Recidīvi Akūtas leikēmijas līdz beigām pirmajā gadā pēc pārstādīt nabassaites asins šūnas ir atrodami 26% gadījumu.

[10], [11]