A vitamīns asinīs

Atsauces vērtības (normāls) A vitamīna līmeņiem (retinolu) asins serumā: bērni 1-6 gadi - 0,7-1,5 mol / l, 7-12 - 0,91-1,71 mmol / l, 13 -19 gadi - 0,91-2,51 μmol / l; pieaugušajiem tas ir 1,05-2,09 μmol / l.

A vitamīns ir saistīts ar taukos šķīstošas un pastāv divās formās - faktiskais vitamīns A vai retinola (atrodams tikai dzīvnieku izcelsmes produktiem) un A pro-vitamīns, kas pazīstams kā karotīnu (gatavots no dzīvnieku vai augu izcelsmes), kas var būt pārvērsta retinola sienām gremošanas trakts. Aptuveni 50-90% no retinola ienākošo pārtikas uzsūcas tievajās zarnās un jāpārvadā hilomikrona saistīti ar kompleksu uz aknām, kur tā tiek glabāta kā retinola palmitāta. Vajadzības gadījumā tas tiek izlaists asinsritē kā retinols, kas tiek kombinēts ar A vitamīnu saistošu olbaltumu. Serumā A vitamīna saistošais proteīns + retinola komplekss saistās ar transtrietīnu. No seruma retinolu uztver mērķa šūnas, piemēram, tīklenes fotoreceptori un epitēlijs.

Kad organisms A vitamīna summu, kas pārsniedz prasības (180-430 mikrogrami retinola dienā atkarībā no vecuma, dzimuma un fizioloģiskā stāvoklī), tā pārpalikums aknās tiek uzklāti veido depo šī vitamīna. Retinola devu samazina no pārtikas, aknu veikali nonāk asinsritē, saglabājot seruma retinola koncentrāciju normālā līmenī (virs 0,7 μmol / L). Citas vitamīna A (retināla un retinoiskās skābes) bioloģiski aktīvās formas asinīs ir ļoti zemās koncentrācijās (zem 0,35 μmol / L); uz retinola esteriem veido apmēram 5% no kopējā A vitamīna (0,1-0,1 μmol / l).

A vitamīnam ir svarīga loma oksidācijas un reducēšanas procesos. Retinols veicina glikogēna veidošanos aknās un muskuļos, uzlabo holesterīna līmenis asinīs ir iesaistīts sintēzi steroīdu un dzimumhormoni. Tā ir vajadzīga izaugsmei un veidošanās kaulu skelets resynthesis rodopsīna, kā arī veicina normālu funkcionēšanu gļotādu un epitēlijā ādas segumu, lai novērstu tās metaplāzija, hiperkeratoze un pārmērīga noslīdēšana. A vitamīns palīdz stiprināt mati, zobus un smaganas. Pēdējos gados, tas parāda dažādas lomu A vitamīna vēža profilaksi un regulēšanai imunitāti (ēteriskās pabeigšanai fagocitozi, palielināt sintēzi Ig, stimulē ražošanu killer T šūnu, stimulē T-Helper tipa II et al.). A vitamīns - aktīvs antioksidants, galvenokārt darbojoties vitamīna E klātbūtnē; tā aizsargā C vitamīnu no oksidācijas. A vitamīna deficīts tiek uzskatīts par ļaundabīgu jaunveidojumu riska faktoru. Eksperimentālajos pētījumos tika parādīts, ka vitamīna A satura palielināšanās diētā palielina vidējo dzīves ilgumu par 17,5%. Cinks ir būtisks vitamīna A metabolisma kofaktors (nepieciešams vitamīna A saistoša proteīna sintēzei).

Dienas vidējā prasība retinola pieaugušajiem (20-50 gadi) bija 1,2 mg (4,000 IU, 1 IU ir vienāds ar 0,3 mikrogramiem retinola) grūtniecēm - 1,5 mg (5000 SV), kas baro bērnu ar krūti - 1, 8 mg (6000 SV) cilvēkiem vecākiem par 60 gadiem - 2,5 mg (10 000 SV). Gatavā veidā ķermenim jāiegūst vismaz trešdaļa retinola ikdienas nepieciešamības; pārējo var absorbēt, izmantojot karotinoīdus, kuru ķermenī veidojas retinols. Jāņem vērā, ka aptuveni 30% retinola pārtikas produktos tiek iznīcināti ar termiskās apstrādes palīdzību. Retinola aktivitāte ir 2 reizes lielāka nekā karotīns, turklāt pēdējais ir absorbēts tikai 30-40% zarnās. Tāpēc, novērtējot uztura devu, tiek uzskatīts, ka 1 mg retinola aptuveni atbilst 6 mg karotinoīdu.

Retinola (A vitamīna) un karotinoīdu noteikšana serumā saskaņā ar Bessey LA Anisimovas modifikācijā.

Metodes princips

A vitamīna un karotinoīdu noteikšana pamatojas uz to hidrolīzi sārmainā spirta šķīdumā, kam seko ekstrakcija ar organisko šķīdinātāju maisījumu.

Reaģenti

• 11 M kālija hidroksīda šķīdums (KOH).
• 96% etilspirts.
• 1 M kālija hidroksīda šķīdums (KOH) 96% etilspirtā: 1 tilpums 11 M KOH šķīduma sajauc ar 10 tilpumiem 96% etilspirta. Reaģentu sagatavo pētījuma dienā. Ja krāsošana notiek maisīšanas laikā, spirtu pirms lietošanas jātīra, destilējot.
• Ksilols, zs
• Oktāns, h.ch.
• Ksilēna-oktāna maisījums: sagatavo, maisot vienādus ksilola un oktāna daudzumus.

Pētījumi tiek veikti ar spektrofotometru.

A vitamīna noteikšanas gaita

Centrifūgas etiķeti ievada no pirksta (apmēram 1 ml) asinis un 20-30 minūtes ievieto stikla kauss ar siltu ūdeni (temperatūra 40-45 ° C). Lai nošķirtu serumu, asins receklis rūpīgi aptin caurulītes malu ar plānu stikla stieni un centrifugē 10 minūtes ar ātrumu 3000 apgr / min.

Izvēlies 0,12 ml seruma un pārnes to aglutinācijas mēģenē, pēc tam pievieno 0,12 ml 1 M spirta kālija hidroksīda šķīduma. Saturs tiek kārtīgi sakrata.

Testa caurules ar zondēm tiek ievietotas ūdens vannā 20 minūtes 60 ° C temperatūrā hidrolīzei.

Paraugus atdzesē un pievieno 0,12 ml ksilēna-oktāna maisījuma, spēcīgi sakrāj 10-15 sekundes. Atkal atdzesē un centrifugē.

Uzmanīgi noņemiet virsējo slāni, kas satur A vitamīnu un karotinoīdus, ar Pasteur pipeti ar gumijas vāku un pārnesiet to uz mikrokustēm.

Paraugi ir spektrofotometriski pie viļņa garuma 328 nm - lai noteiktu A vitamīnu un pie 460 nm viļņu garuma, lai noteiktu karotinoīdus.

Pēc tam, kad spektrofotometriju pētāmās paraugs tiek pakļauts ultravioleto starojumu iznīcināšanai A vitamīna Šim nolūkam, pie attālumā 15-20 cm no kvarca microcuvettes noteiktajā (baktericīdu) lampiņa tā, ka apstarošana pakļauti daļu kivetē, kas piepildīts ar šķidrumu; apstarošanas laiks ir 45-60 minūtes.

Paraugi tiek atkārtoti spektrofotometriski ar viļņa garumu 328 nm. A vitamīna saturu nosaka pēc ekstinkcijas vērtību atšķirībām (optiskais blīvums), ņemot vērā koeficientu 637, ko Bessey aprēķina attiecībā uz A vitamīnu.

Aprēķinu veic pēc formulas:

X = 637 × (Е328 (1) - Е328 (2)),

Kur X ir A vitamīna saturs, μg / dL; 637 ir Bessey aprēķinātais koeficients A vitamīna noteikšanai; Е328 (1) - šķīduma optiskais blīvums pirms apstarošanas; E328 (2) ir šķīduma optiskais blīvums pēc apstarošanas.

Koeficients, lai pārsūtītu A vitamīna koncentrāciju no μg / dL μmol / l, ir 0,035.

Karotenoīdu saturu aprēķina pēc formulas:

X = 480-Е480,

Kur X ir karotinoīdu saturs, μg / dL; 480 ir koeficients, ko Bessey aprēķina karotinoīdu noteikšanai; E480 ir testa šķīduma optiskais blīvums.

Piezīme:

Saskaņā ar Bessey pētījumu laikā var ņemt lielākus vai mazākus seruma tilpumus, taču tā attiecībai pret spirta šķīduma tilpumu jābūt nemainīgai ar ksilēna-oktāna maisījuma tilpuma (daudzuma) izmaiņām.

A vitamīna satura norma asins serumā: jaundzimušajiem un zīdaiņiem - 160-270 μg / l; pieaugušajiem 1,05-2,45 μmol / l (300-700 μg / l). Karotinoīdu saturs pieaugušo serumā ir 800-2300 μg / l.