Dzeltena sēkļa hematopoētiskās cilmes šūnas

Protams, dažādi proliferatīvās un diferenciācija asinsrades cilmes šūnu iedarbības dēļ īpatnībām to ontogenetic attīstības, jo procesā ontoģenēzes cilvēka izmaiņām pat lokalizāciju no galvenajām jomām asinsradi. Augļa dzeltenuma sēkļa hematopoētiskās cilmes šūnas ir apņēmušās veidot tikai eritropoētisku šūnu līniju. Pēc primārā GSK migrācijas uz aknu un liesu šo orgānu mikro vidē, komisijas līniju spektrs paplašinās. Jo īpaši hematopoētiskās cilmes šūnas iegūst spēju radīt limfātiskās līnijas. Pirmsdzemdību periodā asinsvadus saturošās prekursoru šūnas sasniedz gala lokalizācijas zonu un kolonizē kaulu smadzenes. Augļa attīstības procesā augļa asinīs ir ievērojams skaits cilmes šūnu asiņošanas. Piemēram, grūtniecības 13 grūtniecības nedēļā HSC līmenis sasniedz 18% no kopējā mononukleāro asins šūnu skaita. Nākotnē to saturs pakāpeniski samazinās, bet pat pirms dzimšanas NSC daudzums nabassaites asinīs maz atšķiras no to skaita kaulu smadzenēs.

Saskaņā ar klasisko ideju, dabas izmaiņas lokalizāciju asinsradi embrionālās attīstības zīdītāju veic migrācijas un īstenojot jaunu mikrovidi polipotentas asinsrades cilmes šūnas - no dzeltenummaiss uz aknu, liesas un kaulu smadzenēs. Kopš sākumposmā embrionālā attīstības asinsrades audu satur lielu skaitu cilmes šūnas, kas samazina par grūtniecības, visdaudzsološākais iegūšanas asinsradi cilmes šūnas tiek uzskatīts asinsrades augļa aknu audu izolēta no abortnogo materiāla 5-8 nedēļu grūtniecības.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]

Hematopoētisko cilmes šūnu izcelsme

Fakts, ka eritrocītu embrija veidošanās rodas dzeltenuma sēklu asiņu salās, nav apšaubāms. Tomēr in vitro diferenciācija potenciāls asinsrades x dzeltenummaiss šūnām ir ļoti ierobežota (tās atšķirt galvenokārt eritrocītu). Jāatzīmē, ka transplantācija asinsrades cilmes šūnu dzeltenummaiss nespēj atjaunot asinsradi uz ilgu laiku. Izrādījās, ka šīs šūnas nav pieaugušā organisma GSK priekštecis. True GSK parādās agrāk, pēc 3-5 nedēļām augļa attīstību, jo zonā veidošanās kuņģa audu un endotēlija šūnām asinsvadu (paraaortic splanchnopleura, P-SP), un vietā grāmatzīmes aortas Gonādu un primāro nieres - šajā jomā, vai arī tā mesonephros ko sauc par AGM zonu. Ir pierādīts, ka šūnas AGM reģions ir ne tikai avots VDK, bet endotēlija šūnas asinsvadu, un Osteoklastu, iesaistītās kaulu veidošanās procesiem. Uz 6 th nedēļu grūtniecības sākumā asinsrades cilmes šūnas no AGM-rajona ceļot uz aknām, kas ir galvenās asinsrades orgānu auglim pirms dzimšanas.

Tā kā šis punkts ir ļoti svarīgs attiecībā uz šūnu transplantācijas problēma embrija cilvēka laikā izcelsmi HSCs pelnījis detalizētāku prezentāciju. Klasiskā ideja, ka asinsrades cilmes šūnas no zīdītāju un putnu, kas iegūti no adnexal avota, pamatojoties uz pētniecības Metcalf un Moore, kurš pirmais izmanto klonēšanas GSK un viņu pēctečiem, izolētas no dzeltenuma maisiņā. Par savu darbu rezultāti veidoja pamatu migrācijas teoriju, saskaņā ar kuru GSK, vispirms parādījās dzeltenuma maisiņā, konsekventi aizņem pārejošus un galīgos asinsradi orgānus veidošanās procesā savā attiecīgajā mikrovidi. Tādējādi tika konstatēts, ka GSK veidošanās, kas sākotnēji atrodas dzeloņstieņa maisiņā, kalpo par šūnu bāzi galīgajai hematopoēzi.

Asinsrades cilmes šūnas no dzeltenummaiss ir vieni no pirmajiem asinsrades cilmes šūnu. Viņu fenotipu apraksta ar formulu AA4.1 + CD34 + c-kit +. Atšķirībā no HSCs nobriedis kaulu smadzenes, tie nav izteikta SCA-1 antigēni un MHC molekulu. Šķiet, ka izskats marķieru antigēnu uz virsmas membrānas GSK dzeltenummaiss ar kultivēšanas atbilst to diferenciāciju embrija attīstību ar veidošanos izdarīti līnijām hemopoiesis laikā: samazinās ekspresijas līmeni, kas CD34 antigēnu un Thy-1 palielina izpausme CD38 un CD45RA, parādīties HLA-DR molekulas. In turpmākā izraisītas ar citokīnu un augšanas faktoriem, in vitro izpausmi specializācijas sākas antigēnus specifiskus asinsrades cilmes šūnu no konkrētā šūnu līnijas. Tomēr pētījuma embrionālo asinsrades pārstāvjiem trīs klasēm mugurkaulnieku (abiniekiem, putniem un zīdītājiem) rezultātus, un it īpaši analīze izcelsmes HSCs ir atbildīgi par galīgo asinsradi postnatālās ontoģenēzes, pretēji klasiskā idejām. Tika konstatēts, ka ar pārstāvjiem no visām iepriekš minētajām klasēm embrioģenēzes veido divas neatkarīgas jomas, kas piedzīvo GSK. Extraembryonic "klasiskā" reģions pārstāvēta dzeltenummaiss vai tās analogiem, bet nesen identificēts intraembrionalnaya HSC lokalizācijas zonā ietilpst para-aortas mesenchyme un AGM-zonu. Šodien, var apgalvot, ka abinieku un putnu galīgie HSCs iegūti no intraembrionalnyh avotiem, bet zīdītājiem un cilvēkiem GSK daļu dzeltenummaiss galīgas asinsradi joprojām nav iespējams pilnībā novērst.

Embrionālās asinsradi dzeltenummaiss ir būtībā galvenais eritropoēzi, ko raksturo saglabāšanu kodola visos eritrocītu nobriešanu un augļa hemoglobīna sintēzes veida. Saskaņā ar jaunākajiem datiem primārās eritropoēzes vilnis embriju attīstības astotajā dienā beidzas ar dzeltenuma sēklu. Tam seko periods, kurā uzkrājas galīgās eritroīdās cilmes šūnas - BFU-E, kuras veidojas vienīgi dzeltenuma maisiņā un vispirms parādās 9. Grūtniecības dienā. Nākamais embriogēnās stadijas posms jau veido galīgo eritroīdu cilmes šūnu - CFU-E, kā arī (!) Mast-šūnu un CFU-GM. Tā ir balstīta uz to, ka pastāv šī viedokļa, ka rodas galīgie cilmes šūnas no dzeltenummaiss, migrē caur asinsriti, uzkrājas aknās un ātri uzsākt pirmo posmu intraembrionalnogo asinsradi. Saskaņā ar šādu pārstāvību, dzeltenummaiss var uzskatīt, no vienas puses, kā vietā primārā eritropoēzi, un otrs - kā pirmo avotu galīgo hematopoētiskām prekursoru šūnu embrionālo attīstību.

Tas ir redzams, ka koloniju veidojošas šūnas ar augstu proliferācijas potenciāls var tikt izolēti dzeltenummaiss jau 8. Dienā grūtniecības, ti, ilgi pirms slēgšanas asinsvadu sistēmas embrija un dzeltenummaiss. Turklāt, kas iegūti no dzeltenummaiss ar augstu proliferatīvu potenciālu in vitro koloniju veidojošās šūnas, izmēru un šūnu kompozīcija, kas nav atšķiras no attiecīgajiem parametriem kultūras augšanu kaulu smadzeņu cilmes šūnas. Tajā pašā laikā, ar kolonija retransplantācija dzeltenummaiss šūnās ar augstu proliferatīvās potenciālu veido ievērojami lielāku koloniju veidošanas šūnas un meita multipotent cilmes šūnas, nekā ar kaulu smadzeņu asinsrades cilmes šūnu.

Gala secinājums par lomu asinsrades cilmes šūnu dzeltenummaiss galīgo asinsradi var dot rezultātus, kuros autori iegūti līnija endotēlija šūnām dzeltenummaiss (G166), kas faktiski atbalstītajiem viņa šūnu proliferāciju ar fenotipisko un funkcionālām īpašībām HSC (AA4.1 + WGA + zems blīvums un vājas līmes īpašības). Par jaunāko saturu, kad kultivētas apgādes slāņa šūnu S166 par 8 dienas pieauga vairāk nekā 100 reizes. Jauktajā kolonijas audzēti uz izolējošā par S166 šūnu līniju, tika identificēti makrofāgi, granulocītu, megakariocītu, monocītu un domnu šūnas, un prekursoru šūnu B un T limfocītu. Dzeltenummaiss šūnas, aug uz apakšslānis endotēlija šūnām piemīt spēja reproducēt sevi un notika eksperimentos autoru trīs fragmenti. Atgūšana caur tiem asinsradi pieaugušo pelēm ar smagu kombinētu imūndeficītu (SCID) pievieno veidošanās visu leikocītu veidu, kā arī T un B limfocītu. Tomēr autori savos pētījumos, izmantojot šūnas no dzeltenummaiss 10 dienu embriju, no kura ārpustiesas un intraembrionalnye asinsvadu sistēma jau ir slēgts, tas neizslēdz klātbūtni starp šūnu dzeltenummaiss GSK intraembrionalnogo izcelsmi.

Tajā pašā laikā, analīze diferenciācijas potenciālu asinsrades šūnu agrīnās attīstības stadijā, pirms apvienojot izvēlēto asinsvadu sistēmu embrija un dzeltenummaiss (8-8.5 dienas grūtniecības) atklāja klātbūtni prekursoru T un B šūnu šajā dzeltenummaiss, bet ne ķermeņa embriju . In vitro metode no divpakāpju kultivēšanas sistēmas uz vienslāņa epitēlija un subepithelial šūnas Aizkrūts mononukleāriem tika diferencēti uz dzeltenummaiss pre-T un nobriedis T-limfocītu. Saskaņā ar tiem pašiem kultūras apstākļos, bet uz vienslāņa stromas šūnās aknu un kaulu smadzeņu mononukleāro šūnu dzeltenuma maisiņā tika diferencēti vērā iepriekš B šūnu un nobriest IglVT-B-limfocītu.

Šo pētījumu rezultāti liecina, ka iespēju attīstību šūnu imūnās sistēmas no extraembryonic dzeltenummaiss audos, veidojot primārās T un B šūnu līnijās atkarīga no faktoriem, asinsrades stromas mikrovides no embrija orgānu.

Citi autori arī norādīja, ka dzeltenummaiss šūnas ar potencēm ietver limfātisko diferenciāciju, un veidojas limfocīti neatšķiras no šiem antigēna īpašībām nobriedušos dzīvniekiem. Ir konstatēts, ka šūnas no dzeltenummaiss 8-9 dienu embrijam var atjaunot aizkrūts dziedzera lymphopoiesis kas atimotsitarnom ar parādīšanos nobriedušu CD3 + CD4 + - un CD8 + SDZ + limfocītu, kam ir dekorēta repertuāru T šūnu receptoriem. Tādējādi, aizkrūts dziedzeris var apdzīvota šūnas adnexal izcelsmes, bet tas ir iespējams, lai izslēgtu iespēju, migrācijas aizkrūts cilmes šūnu ar T limfocītu no intraembrionalnyh lymphopoiesis avotiem.

Tomēr transplantāciju dzeltenummaiss asinsrades šūnās apstarotas pieaugušo adresātiem ne vienmēr ir pabeigts Atkalapdzīvināšana sen izpostīti zonas asinsrades audu lokalizācija, a in vitro šūnu dzeltenummaiss veidot liesas kolonijas daudz mazāka, nekā šūnās AGM-zonā. Dažos gadījumos, izmantojot dzeltenummaiss šūnu 9 dienu embrijs joprojām ir iespējams sasniegt ilgtermiņa (līdz 6 mēnešiem) populācijas atjaunošana asinsrades audu apstarotās saņēmējiem. Autori uzskata, ka šūnas dzeltenummaiss fenotipa CD34 + c-Kit + ar savām spējām repopulate izpostītajā asinsrades orgānu, ne tikai neatšķiras no tiem, kas AGM-reģionā, bet arī efektīvāk atjaunot asinsradi, kā dzeltenummaiss tie satur gandrīz 37 reizes vairāk .

Jāatzīmē, ka eksperimentos, asinsrades šūnas dzeltenummaiss ar marker antigēnus GSK (c-kit + un / vai CD34 + un CD38 +), kas tika ieviestas tieši aknās vai vēdera vēnu pēcnācēju peļu mātītēm, kas saņēma injekcijas Busulfāna 18. Dienai grūtniecību. Šajos jaundzimušiem dzīvniekiem pašu Mielopoēzes bijis strauji nomākts dēļ likvidēšanu asinsrades cilmes šūnu izraisa busulfāna. Pēc transplantācijas, HSCs no dzeltenummaiss mēnešiem un perifērās asins saņēmēju identificē asinsķermenīšiem, kas satur donora marķieri - glitserofasfatdegidrogenazu. Tas ir konstatēts, ka dzeltenummaiss no GSK samazināts saturu limfoīdo šūnu, mieloīdas un eritroīdajās ciltskoks asins, aizkrūts dziedzeris, liesā un kaulu smadzenēs, kur līmenis himērismu bija augstāks gadījumā intrahepatiska, ne intravenozo dzeltenummaiss šūnām. Autori norāda, ka HSCs par dzeltenummaiss embriju agrīnās attīstības stadijā (līdz 10 dienām) par veiksmīgu atrisinājumu asinsrades orgānu pieaugušo saņēmēju, kam nepieciešama iepriekšēju sadarbību ar asinsrades mikrovidi aknas. Tas ir iespējams, ka embrioģenēzes ir unikāla attīstības stadijā, kad šūnas no dzeltenummaiss, migrē galvenokārt aknās, un tad iegūst spēju kolonizēt stroma asinsrades orgānu pieaugušo saņēmējiem.

Šajā sakarā jāatzīmē, ka himērismu šūnu imūnās sistēmas bieži novērots pēc transplantācijas kaulu smadzeņu šūnās apstaroti saņēmējiem seksuāli nobriedušiem - in asins šūnu donora pēdējo fenotipu, kas pietiekami lielos daudzumos ir atrodami starp B un T limfocītu un granulocītu saņēmējam, kas ilgst vismaz 6 mēneši.

Morfoloģiskās metodes asinsradi šūnu zīdītājiem pirmais konstatēti 7. Dienā embrija attīstību un iepazīstina asinsradi salās kuģiem dzeltenummaiss. Tomēr dabas asinsrades diferenciācija dzeltenummaiss tikai primārie eritrocīti saglabājot kodolu un sintezējot augļa hemoglobīna. Tomēr tradicionāli tika uzskatīts, ka dzeltenummaiss ir vienīgais avots VDK migrē uz asinsrades orgānu augļa attīstību un sniegt galīgu asinsradi pieaugušiem dzīvniekiem, jo izskats HSC ķermeņa embrija ir slēgšana asinsvadu sistēmas embrija un dzeltenummaiss. Lai atbalstītu šo viedokļa, saskaņā ar datiem, ka in vitro klonēšanas šūnu dzeltenummaiss izraisīt granulocītu un makrofāgu A in vivo - liesas kolonijām. Tad transplantācijas eksperimentu laikā tika konstatēts, ka asinsrades šūnas dzeltenummaiss, kas, dzeltenummaiss spēj atšķirt tikai uz primāro sarkano asins šūnu mikrovides aknu jaundzimušo un pieaugušo SCID-pelēm izpostīja dziedzeri vai stromas pakārtotais iegūst spēju repopulate hemopoētisko orgānu ar atjaunošanu visu hemopoēzes līnijas pat pieaugušajiem saņēmušajiem dzīvniekiem. Principā to var attiecināt tos uz kategoriju patiesas GSK - tāpat šūnu funkcionēšanu un pēcdzemdību periodā. Tiek pieņemts, ka dzeltenummaiss kopā ar AGM reģionā, avots HSCs galīgajai asinsradi zīdītāju, tomēr joprojām nav skaidrs, par to ieguldījumu attīstībā asinsrades sistēmu. Es nesaprotu bioloģisko nozīmi un pastāvēšanu agrīnā embrioģenēzes zīdītāju, divi asinsrades orgānu ar līdzīgām funkcijām.

Atbilžu meklēšana uz šiem jautājumiem turpinās. In vivo izdevies pierādīt klātbūtni dzeltenummaiss embriju 8-8,5-diena šūna lymphopoiesis samazināšanā sublethally apstarotu SCID-pelēm ar smagu deficītu T un B limfocītu. Dzeltena sēnas asinsvadus šūnas ievadīja intraperitoneāli un tieši liesas un aknu audos. Pēc 16 nedēļām saņēmēju identificē TCR / CD34 \ CD4 + un CD8 + T-limfocītu un B-220 + IgM + B šūnām marķēts antrhgenami donors MHC. Ķermenī nebija atrodami 8 - 8,5 dienu cilmes šūnu embriji, kas spēj atjaunot imūnsistēmu.

Dzeltenummaiss asinsrades šūnām piemīt augsts proliferatīvās potenciālu un spēj ilgtermiņa pašatražošanu in vitro. Daži autori ir atklājuši šos šūnas kā pamatu ilgtermiņa HSC (apmēram 7 mēneši) paaudzes eritrocītu cilmes šūnu, kas atšķirtos no kaulu smadzeņu cilmes šūnu eritrocītu līnijas pārsējot ilgāku laiku, liela izmēra kolonijas, paaugstināta jutība pret augšanas faktoriem un vairāk ilgstošas izplatīšanu. Turklāt, ievērojot attiecīgos apstākļus dzeltenās sēklu audzēšanai in vitro, tiek veidotas arī limfu prekursoru šūnas.

Šie dati liecina par vispārēju avotu dzeltenummaiss GSK, kur mazāk par apņēmušies, un tāpēc ir liels proliferāciju potenciāls nekā kaulu smadzeņu cilmes šūnām. Tomēr, neskatoties uz to, ka dzeltenummaiss satur polipotentas asinsradi cilmes šūnas, ilgtermiņa atbalsta dažādas līnijas asinsrades diferenciācijas in vitro, vienīgais kritērijs lietderību GCW ir to spēja repopulate ilgstošus asinsradi orgānus saņēmēja, asinsradi, šūnas, kas ir ģenētiski nepilnīga vai bojāta. Tādējādi galvenais jautājums ir, vai pluripotentam asinsrades šūnas dzeltenummaiss migrēt un kolonizēt asinsradi orgānu un tselesoorbrazno pārskatīt slaveno darbu, kas parādīja spēju repopulate asinsrades orgānu seksuāli nobriedušiem dzīvniekiem ar veidošanos no galvenajiem hematopoētiskām līnijām. Embrijiem putnu 70. Gadu tika identificēti intraembrionalnye avotiem galīgo HSC ka jau apšaubīt konstatētos priekšstatus par izcelsmi adnexal GSK, tostarp pārstāvji no citām klasēm mugurkaulniekiem. Jo pēdējos gados bija publikācijas par klātbūtni zīdītāji un cilvēki līdzīgas intraembrionalnyh teritorijas, kurās GSK.

Vēlreiz mēs atzīmējam, ka pamata zināšanas šajā jomā ir ārkārtīgi svarīgi, lai praktiski šūnu transplantāciju, jo ne tikai palīdzēs noteikt vēlamo avotu HSC, bet arī noteikt īpatnības mijiedarbības primārās asinsrades šūnas no ģenētiski ārvalstu organismiem. Ir zināms, ka ievadīšanas no cilvèka asinsrades cilmes šūnas augļa aita aknu organoģenēzes embrija stadijā noved pie ražošanai himēro dzīvniekiem, asinis un kaulu smadzenēs tiek stabili nosaka no 3 līdz 5% no cilvèka asinsrades šūnām. Šajā gadījumā, cilvēka HSCs nemaina savu kariotips, vienlaikus saglabājot augstu līmeni izplatīšanu un spēju atšķirt. Bez tam, pārstādīti ksenogēnas HSC nav pretrunā ar imūno sistēmu un fagocītiskajās šūnām saimnieka organismā un nav pārveidots audzēja šūnu, kas ir par pamatu intensīvas attīstības metožu intrauterīnā korekcijai pārmantojamu ģenētisku slimību, izmantojot ESP vai HSCs transfected deficītu gēni.

Bet kādā embriogēnijas stadijā ir piemērotāk veikt šādu korekciju? šūnas pirmo reizi, noteikti uz asinsradi zīdītāju parādās tūlīt pēc implantācijas (grūtniecības 6 dienas), kad morfoloģiskās īpašības asinsrades diferenciācijas un iespējamās asinsrades orgānu vēl nav pieejami. Šajā posmā, izklīdinātā peles embrija šūnas var repopulate asinsrades orgāniem apstaroti adresātiem, lai veidotu eritrocītus un limfocītu, kas atšķiras no saimniekorganisma šūnās vai hemoglobīna tipam, attiecīgi glitserofosfatizomerazy un papildu hromosomu marķieri (TB), kas donoru šūnām. In zīdītājiem, kā putni, kopā ar dzeltenummaiss uz slēgšanu kopējā asinsvados tieši ievadīšana organismā embrija para-aortas splanhnoplevre parādīties hemopoētisko šūnas. No AGM-piešķirto zonas asinsrades šūnas AA4.1 + fenotipu, identificē kā multipotent asinsrades šūnas, kas veido T un B limfocītu, granulocītu, megakariocītu un makrofāgi. Fenotipiski, šie multipotent cilmes šūnas ir ļoti tuvu pie kaula smadzeņu HSCs pieaugušiem dzīvniekiem (CD34 + c-kit +). Par multipotent AA4.1 + šūnu starp visiem AGM-šūnu apgabalā skaits ir neliels - tie ir ne vairāk kā 1/12 daļa no tā.

Cilvēka embrijā tika atrasts arī homologs dzīvnieku AGM reģions, kas satur intraembrionu reģionu, kas satur HSC. Turklāt cilvēkiem embrija ķermenī ir vairāk nekā 80% daudzpotentās šūnas ar augstu proliferācijas potenciālu, lai gan šajās šūnās ir dzeltenā maisiņā. Detalizēta to lokalizācijas analīze parādīja, ka simtiem šādu šūnu ir samontētas kompaktajās grupās, kas atrodas tuvu muguras aortas ventrālās sienas endotēlija tuvumā. Fenotipiski tie ir CD34CD45 + Lin šūnas. Gluži pretēji, dzeltenā maisiņā, kā arī citos embriju asinsvados (aknās, kaulos smadzenēs) šādas šūnas ir vienādas.

Līdz ar cilvēka embriju AGM reģions satur kopas asinsrades šūnas, kas ir cieši saistīti ar vēdera muguras aorta endotēlija. Šis kontakts var izsekot un imūnķīmiskas līmenis - un kopas asinsrades øúnu un endotēlija šūnām, kas izsaka asinsvadu endotēlija augšanas faktora, Flt-3 ligandu un to receptori flk-1 un stk-1, kā arī transkripcijas faktora leikēmija cilmes šūnas. AGM zonas mezenhimâlo atvasinājumi pārstāv blīvs tyazhem noapaļots šūnas, kas atrodas gar muguras aortas un izsakot tenascin C - glikoproteīna pamatvielu aktīvi piedalās procesos šūnu šūnu mijiedarbību un migrāciju.

Multipotent cilmes šūnas AGM-rajons pēc transplantācijas ātri atjaunot asinsradi pieaugušo pelēm un pakļauti ilgu laiku (līdz 8 mēnešiem) nodrošina efektīvu asinsradi. Šūnu dzeltenumu maisiņā ar šādām īpašībām autori neatklāja. Šā pētījuma rezultāti apstiprina citu darbu, kas parādīja, ka sākumposmā attīstības embriju (10,5 dienas) AGM reģions ir vienīgais avots, šūnas, kas atbilst definīcijai GCW, mieloīdo un limfātisko atjaunojat asinsradi pieaugušo apstaroti adresātus.

No AGM-piešķirtas platība stromas line AGM-S3, kas atbalstītu paaudzes šūnu kultūras CFU ĢM izdarīti cilmes šūnu, BFU-E, CFU-E un CFU jaukta tipa. Pēdējā saturs audzēšanas laikā AGM-S3 šūnu barības apakšslānī palielinās no 10 līdz 80 reizēm. Tāpēc, mikrovides un AGM-reģiona pašreizējos stromas šūnās, efektīvi atbalstot asinis, tāpēc viņš AGM-zona labi var kalpot embrionālo asinsrades orgānu - galīgo avotu HSC, tas ir, GSK veido asinsrades audu pieauguša dzīvnieka.

Advanced immunofenotipirovanie šūnu sastāvs AGM reģions parādīja, ka tā dzīvo ne tikai multipotent asinsradi šūnas, bet arī šūnas no apņēmusies mieloīdas un limfoīdo (T un B limfocīti) diferenciāciju. Tomēr, kad molekulārā analīze no individuālā CD34 + c-kit + šūnas no AGM-reģionā, izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju atklāja aktivizējot tikai beta-globin un myeloperoxidase bet ne limfoīdas gēnus, kas kodē sintēzi CD34, Thy-1, un 15. Daļējas aktivizācijas Lineage īpašus gēnus tipisku HSC un progenitoru šūnu agrīnās ontogēnās attīstības stadijas. Ņemot vērā, ka vairāki kommiti- Rowan granulocītu-makrofāgu AGM zonas 10 dienu embrijs pēc 2-3 kārtām zemāka nekā aknās, var apgalvot, ka embrionālo asinsrades AGM 10 dienas ir tikai sākums, bet galvenokārt šajā periodā jau tiek izmantotas hematopoētiskās līnijas.

Patiešām, atšķirībā no iepriekšējās (9-11 dienas) un asinsrades cilmes šūnu dzeltenuma maisiņā un jomā kopsapulces, kas repopulācijas asinsrades mikrovides jaundzimušajiem, bet ne pieaugušo, asinsrades cilmes šūnu 12-17 dienu augļa aknas neprasa agrīno mikrovidi un asinsrades orgānu aizņem pieaugušais dzīvnieks nav sliktāka par jaundzimušo. HSCs pēc transplantācijas augļa aknas pieaugušo asinsradi apstarotās saņēmējvalstīs pelēm bija poliklonālajiem raksturs. Turklāt, izmantojot apzīmētas kolonijas ir redzams, ka darbība noteikto klonu bija pilnīgi paklausa klonu pēctecība, konstatēts pieaugušo kaulu smadzenēs. Tāpēc, GSK augļa aknas atzīmēta kā ļoti maigu nosacījumus bez prestimulyatsii eksogēno citokīnu, jau ir pamata atribūti pieaugušo HSCs nav vajadzīgas sākumā pēc embrija mikrovidi, importēt stāvoklī dziļā miera pēc transplantācijas un mobilizē klonoobrazovanie secīgi saskaņā ar modeļa klonu kārtas.

Acīmredzot mums vajadzētu vairāk noskaidrot klonu pēctecības fenomenu. Eritropoēze satur cilmes šūnu hemopoētiskas šūnas ar augstu proliferācijas potenciālu un spēju diferencēt visas saistītās prekursoru asiņu šūnas. Ar normālu hematopoēzi lielākā daļa hematopoētisko cilmes šūnu paliek dermatoloģiskā stāvoklī un tiek mobilizētas proliferācijai un diferenciācijai, secīgi veidojot secīgus klonus. Šo procesu sauc par klonu pēctecību. Eksperimentāli pierādījumi par klonu pēctecību hematopoētiskajā sistēmā iegūti pētījumos ar GSK, kas apzīmēts ar retrovīrusu gēnu pārnesi. Pieaugušiem dzīvniekiem hematopoēzi uztur daudzi vienlaicīgi funkcionējoši asinsritiermas kloni, kas iegūti no GSK. Balstoties uz klonu pēctecības fenomenu, tika izstrādāta atkārtota pieeja GCS identifikācijai. Saskaņā ar šo principu, atšķirt ilgtermiņa HSCs (ilgtermiņa asinsrades cilmes šūnu, LT-HSC), spēj atjaunot asinsrades sistēmu mūžizglītības, un īstermiņa VDK, lai veiktu šo darbību uz ierobežotu laika periodu.

Ja mēs uzskatām hemopoētisko cilmes šūnas ziņā repopulyatsionnogo pieejas, no hematopoētiskām augļa aknu šūnu īpašība ir to spēja izveidot koloniju, kas pēc lieluma ir daudz augstāka nekā ar GSK nabassaites asins vai kaulu smadzenēs pieaugumu, un tas attiecas uz visiem koloniju veidiem. Šis fakts jau norāda uz embrionālo aknu hematopoētisko šūnu lielāku proliferācijas potenciālu. Unikāla iezīme asinsrades cilmes šūnu Augļa aknu - īsāks, salīdzinot ar citiem avotiem šūnas cikla, kas ir svarīgi, raugoties no efektivitātes populācijas atjaunošana asinsradi transplantācijai. Analīze šūnu sastāva hematopoētisko suspensijas, ko iegūst no avotiem nobriedušu organisma, liecina, ka visos posmos attīstību savstarpēji kodolaino šūnu advantageously pārstāvis termināli diferencētu šūnu, skaitu un fenotipu, kas atkarīgs no vecuma donora asinsrades ontogenetic audiem. It īpaši, apturēšana mononukleāro kaulu smadzenēs un vadu asins šūnu ar vairāk nekā 50% sastāv no nobriedušu limfoīdo Lineage šūnām, tā kā mazāk nekā 10% no limfocītu atrodams augļa aknas asinsrades audiem. Turklāt mieloīdām line šūnas augļa aknās un augļa eritroīdajām izdevīgi iesniegta blakus, bet nabas saites asins un kaulu smadzeņu granulocītu-makrofāgu dominē elementus.

Svarīgi ir fakts, ka embrionālajās aknās ir pilns pirmais hemopoēzes priekšgājēju komplekts. Pēdējās ir eritroīdas, granulopoētiskās, megakariopoētiskās un daudzlīmeņu kolonijas veidojošās šūnas. Viņu vairāk primitīvas cilmes šūnu - LTC-IC - spēj vairoties un diferencēt in vitro, 5 vai vairāk nedēļas, un arī saglabāt funkcionālo aktivitāti pēc iemājot organismā saņēmēja allogēniem, un pat ksenogēnu transplantācija uz dzīvniekiem ar imūndeficītu.

Bioloģiskā iespējamība pārsvars augļa eritrocītu aknu šūnu (līdz 90% no kopējā asinsrades šūnas), sakarā ar nepieciešamību nodrošināt eritrocītu masa strauji pieaug asins apjomu jaunattīstības auglim. In augļa aknu eritropoēzi kodoljautājumiem eritroīdajām prekursori pārstāv dažādas pakāpes termiņu, kas satur augļa hemoglobīna (a2u7), kas ir saistīts ar augstāka afinitāte pret skābekli nodrošina efektīvu absorbēšanu pēdējais no mātes asinīm. Pastiprināšana eritropoēzi augļa aknās ir saistīts ar vietējo pieaugumu sintēzē eritropoetīna (EPO). Jāatzīmē, ka īstenošana asinsrades potenciāla hematopoētiskām augļa aknu šūnu pietiekami klātbūtne alone eritropoetīna, tā kā šūnu līniju saistības eritropoēzi kaula smadzeņu HSCs un saites asins prasa kombinēt citokīnu un augšanas faktoru, kas sastāv no EPO, SCF, GM-CSF un IL-3. Šajā agrīnajā asinsrades cilmes šūnās, kas izolētas no augļa aknām bez receptoriem EPO, nereaģē uz eksogēno eritropoetīnu. Inducēšanai eritropoēzi apturēta augļa aknas mononukleāriem prasa klātbūtni vairāk uzlabotas eritropoetinchuvstvitelnyh šūnām ar fenotipu CD34 + CD38 +, kas ekspresē EPO receptoru.

Literatūrā vēl nav vienprātības par hemopoēzes veidošanos embrija periodā. Nav konstatēts, ka pastāv un funkcionālo nozīmi ārpustiesas un intraembrionalnyh avotu asinsrades cilmes šūnu. Tomēr nav šaubu, ka embrioģenēzes cilvēka aknas ir galvenais orgāns asinsradi un 6-12 grūtniecības nedēļās ir galvenais avots, asinsrades cilmes šūnas, kas apdzīvo liesa, aizkrūts un kaulu smadzeņu, VDR sasniegt saistītās funkcijas pirms un pēcdzemdību periodu attīstība.

Jāatzīmē vēlreiz, ka embrija aknām, salīdzinot ar citiem avotiem, raksturīgs visaugstākais HSC saturs. Aptuveni 30% embrija aknu CD344 šūnu veido CD38 fenotipu. Vienlaikus limfātisko prekursoru šūnu skaits (CD45 +) agrīnās hematopoēzes stadijās aknās ir ne vairāk kā 4%. Tika konstatēts, ka, tā kā augli no 7 līdz 17 grūtniecības nedēļām, skaits B limfocīti palielinās pakāpeniski ar ikmēneša "solis" ir 1,1%, bet līmenis GSK pastāvīgi samazināts.

Hematopoētisko cilmes šūnu funkcionālā aktivitāte ir atkarīga arī no to avota embrionālās attīstības perioda. Pētīšana aknu šūnu koloniju veidošanās aktivitātes cilvēku embriju 6-8 minūtes un 9-12 minūtes grūtniecības nedēļas kad kultivētas bieza masa nesēja klātbūtnē SCF, GM-CSF, IL-3, IL-6 un EPO parādīja, ka kopējais skaits kolonijām 1 , Kas ir 5 reizes lielāks, ja sāka HSV embrionālās aknas agrīnā attīstības stadijā. Tajā pašā laikā, skaits, aknu cilmes šūnu Mielopoēzes kā CFU-GEMM pēc 6-8 nedēļām embrioģenēzes ir vairāk nekā trīs reizes vairāk par 9-12 grūtniecības nedēļās. Kopumā, aknas asinsrades koloniju veidojošo aktivitāti pirmā trimestra grūtniecības embrija šūnās bija ievērojami lielāks nekā tas augļa aknu šūnās otrā trimestra laikā.

Minētie dati liecina, ka augļa aknas sākumā embrioģenēzes raksturo ne tikai augsts saturs agrīnās asinsrades cilmes šūnu, taču tās asinsrades šūnas raksturo plašu diferenciācijas stāšanās dažādu šūnu līnijās. Šie funkcionālo aktivitāti cilmes asinsrades augļa aknu šūnas pazīmes var būt dažas klīniska nozīme, jo to kvalitatīvās īpašības ļauj gaidāms terapeitisko efektu, kad izteica transplantācija pat nelielu daudzumu šūnu, kas iegūtas agrīnā grūsnības posmos.

Tomēr efektīvajai transplantācijai nepieciešamo hematopoētisko cilmes šūnu skaita problēma joprojām ir atklāta un svarīga. Tika veikti mēģinājumi to atrisināt, izmantojot in vitro hematopoētisko šūnu pašreproducējošo embriju aknu reproduktīvo potenciālu, stimulējot citokīnus un augšanas faktorus. Ar pastāvīgu embrionālo aknu agrīnā GSC bioreaktora perfūziju pēc 2-3 dienām izejas laikā ir iespējams iegūt cilmes šūnu skaitu, kas ir 15 reizes lielāks par to pamatvērtību. Salīdzinājumam, jāatzīmē, ka, lai sasniegtu 20 reizes lielāku HSC nabassaites asiņu daudzumu tādos pašos apstākļos, tas aizņem vismaz divas nedēļas.

Tādējādi embrija aknās atšķiras no citiem hematopoētisko cilmes šūnu avotiem, kuros ir augstāks saturs gan saistītās, gan agrīnās hematopoētiskās cilmes šūnās. Kultūrā ar augļa aknu šūnās ar augšanas faktoriem ar fenotipa CD34 + CD45Ra1 CD71l0W formā 30 reizes vairāk kolonijas nekā līdzīgiem vads asins šūnas, un 90 reizes vairāk nekā kaulu smadzenēs HSCs. Visvairāk šajās atšķirību satura agrīnās asinsrades cilmes šūnu, kas veido jauktas kolonijas avotiem - skaits CFU-GEMM augļa aknās pārsniedz nabassaites asinīs un kaulu smadzenēs, attiecīgi 60 un 250 reizes.

Svarīgi ir tas, ka līdz 18. Nedēļai embrionālo attīstību (laikā sākumu asinsradi kaula smadzenēm) ar asinsrades funkciju īstenošanu ietver vairāk nekā 60% no aknu šūnām. Kopš pirms 13 nedēļas augļa attīstības cilvēkiem ir prom aizkrūts dziedzeris un thymocytes attiecīgi transplantāciju hematopoētiskām augļa aknu šūnās 6-12 grūtniecības nedēļās ievērojami samazina risku, ka reakcija "transplantāts pret saimnieku", un neprasa izvēli par histocompatible donora, jo tas ļauj salīdzinoši viegli sasniegt hemopoētiskais ķimerisms.