Konfokālā mikroskopija

Konfokālā mikroskopija pašlaik tiek uzskatīta par vienu no daudzsološākajām in vivo ādas attēlveidošanas metodēm, tāpēc interese par to ir neparasti liela gan klīnicistu, gan pētniecības institūtu pārstāvju vidū.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ]

Konfokālās mikroskopijas iespējas

Dermatoloģijā konfokālo lāzermikroskopiju izmanto:

• savienojumu iekļūšanas ādā izpēte (iekļūšanas ceļi, kinētika, izplatība ādā);
• dziedzeru darbības novērošana (aktīvā un pasīvā stāvokļa noteikšana);
• mikrocirkulācijas gultnes pētījumi (arī reāllaikā);
• Neoplazmu diagnostika.

Neapspriežot iepriekš minēto konfokālās mikroskopijas veidu priekšrocības un trūkumus, mēs atzīmējam, ka pēdējos gados fluorescences lāzera konfokālā mikroskopija ir kļuvusi arvien populārāka.

[ 5 ], [ 6 ], [ 7 ]

Konfokālā mikroskopija ādas izmeklēšanai

Konfokālais mikroskops sniedz divas nenovērtējamas iespējas – audu pētīšanu šūnu līmenī fizioloģiskas vitālās aktivitātes stāvoklī un pētījuma rezultātu (t. i., šūnu aktivitātes) demonstrēšanu četrās dimensijās – augstumā, platumā, dziļumā un laikā. Attēla kvalitātei un pētījuma dziļumam vissvarīgākā loma ir audu spējai laist cauri gaismu, citiem vārdiem sakot, to caurspīdībai. Konfokālās mikroskopijas metode ir bezkontakta, gaismas stars nerada nekādu kaitējumu vai diskomfortu ne izmeklējamajam pacientam, ne izmēģinājuma dzīvniekam.

Ādas izmeklēšanai tiek izmantota konfokālā skenējošā lāzermikroskopija (CSLM). Šī metode ļauj redzēt epidermu un dermas papilāro slāni ar izšķirtspēju, kas ir tuvu histoloģiskai. Visi izmeklēšanas rezultāti tiek attēloti monitorā un saglabāti kā attēlu failu pakete (kā mikrofilma (dinamikā) vai mikrofotogrāfijas).

Metodei ir divi veidi:

• atstarojošs (atstarojošais CSLM) - pamatojoties uz to, ka dažādām intracelulārām un starpšūnu struktūrām ir atšķirīgi gaismas refrakcijas rādītāji, kas ļauj iegūt kontrasta attēlu.
• fluorescence (fluorescences CSLM) — izmanto lāzera gaismu, kas iekļūst ādā un ierosina tajā esošos ekso- vai endohromoforus, kas, reaģējot uz to, sāk izstarot fotonus (t. i., fluorescēt).

Sānu izšķirtspēja ir minimālais attālums starp punktiem, kas atrodas horizontālā plaknē, t. i., plaknē, kas ir paralēla ādas virsmai. Aksiālā izšķirtspēja ir minimālais attālums starp punktiem, kas atrodas plaknē, kas ir perpendikulāra ādas virsmai.

[ 8 ], [ 9 ], [ 10 ], [ 11 ], [ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Konfokālās mikroskopijas vēsture

Ideja par mikroskopa izveidi, kas spēj parādīt dzīvo audu griezumu šūnu līmenī, aktīvi attīstījās pirms 130 gadiem. Mūsdienu mikroskopu galvenais elements tika izstrādāts 19. gadsimta beigās un bija rotējošs disks ar sīkiem caurumiņiem, kas izvietoti spirālē. Šo disku 1883. gadā izgudroja vācu students Pauls Nipkovs, kura vārdā tas tika nosaukts - Nipkova disks (jeb Nipkova disks). Izgudrojums balstījās uz gaismas spēju, izejot caur sīkiem caurumiņiem diskā un palielināmo stiklu, iekļūt dziļi audos un apgaismot šūnas fragmentu attālumā no virsmas. Kad disks ātri griežas, fragmenti veido vienotu attēlu. Pārvietojot struktūru prom no objekta vai tuvāk tam, ir iespējams mainīt pētāmo audu optiskā griezuma dziļumu.

Tikai līdz ar videomagnetofonu parādīšanos 20. gs. astoņdesmitajos gados un datoru, kas spēj apstrādāt attēlus, parādīšanos 20. gs. deviņdesmito gadu sākumā kļuva iespējams izveidot un efektīvi izmantot mūsdienu mikroskopus, ko izmanto mūsdienās.